最新蚕豆病的设计性实验(1)课件ppt.ppt

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1、蚕豆病的设计性实验(1)案例患儿,男性,3岁,因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后,今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色,面色苍白。据家长反映,患者的姐姐也曾发生过类似情况。体格检查:体温38℃,脉搏150次/分,呼吸40次/分,血压80/60mmHg,呼吸急促,神清,萎靡,面色苍白,皮肤及巩膜黄染,体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常,肝、脾未触及,双肾区无叩击痛,神经系统检查未及异常。实验室检查:红细胞1.98×1012/L,血红蛋白53g/L,血清总胆红素85.5µmol/L,结合胆红素13.7µmol/L,未结合胆红素7

2、1.8µmol/L,尿蛋白(++),潜血(+),尿胆红素(-),尿胆素原(+),尿液镜下未见红细胞。理论依据溶血性黄疸:由于红细胞的大量破坏,使胆红素产生过多,超过了肝细胞摄取结合的能力,使得尿中尿胆原和尿胆素含量增多。葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏,输血不当均会引起病症蚕豆病:葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏。患者大多在食用蚕豆后发生急性溶血性贫血。典型病人常出现由于大量红细胞破坏释放出胆红素二导致的溶血性黄疸,恶心呕吐,尿液呈酱油样等症状患儿正常(儿童)红细胞1.98×1012/L4.0×1012~5.3×1012/L血红蛋白53g/L120

3、-140g/L血清总胆红素85.5µmol/L1.71~17.1μmol/L结合胆红素13.7µmol/L0~3.42μmol/L未结合胆红素71.8µmol/L0~13.68μmol/L尿蛋白(++)潜血(+)尿胆红素(-)尿胆素原(+)从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果主要临床表现:1.血尿、排酱油色尿、面色苍白2.皮肤及巩膜黄染3.体温升高4.呼吸急促1.血尿、排酱油色尿、面色苍白G6PD↓GSH的主要作用:①保护红细胞内的含硫氢基(-SH)血红蛋白、酶蛋白和膜蛋白的完整性,免遭氧化②与谷胱甘肽过氧化酶共同使H2O2

4、还原成H2O→NADPH+H+↓→红细胞的抗氧化能力↓→GSH↓→红细胞膜破裂→溶血性贫血(面色苍白)→游离Hb>肾吸收阈值→血红蛋白尿/含铁血黄素尿2.皮肤及巩膜黄染3.体温升高机理:红细胞破裂↓血红蛋白暴露↓免疫系统攻击(单核-吞噬细胞系统)↓体温升高4.呼吸急促溶血性贫血↓具有载O2能力的Hb含量下降↓机体缺O2↓呼吸急促实验设计高铁血红蛋白还原法实验思路患者姐姐出现过此类状况推测属于家族性遗传,且患者在食用蚕豆后出现症状,故即有可能为蚕豆病。6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏影响高铁血红蛋白的还原,故可以依据如下反应机制设计实验。亚铁

5、血红蛋白高铁血红蛋白高铁血红蛋白还原酶NADPH(辅酶)亚甲蓝(递氢体)亚硝酸钠实验反应方向一、实验目的1、检测患者体内6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性以及发病原因2、掌握高铁血红蛋白还原法测6-磷酸葡萄糖脱氢酶的实验原理及方法3、了解蚕豆病的发病机制及原因二、实验原理在全血中加入亚硝酸钠,使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白(MHb),高铁血红蛋白在高铁血红蛋白还原酶的作用下又被还原为亚铁血红蛋白。在这过程中,高铁血红蛋白还原酶不仅需要亚甲蓝作为递氢体,还需要由G6PD参与磷酸戊糖途径形成NADPH作为辅酶才完成上述反应。所以,G6

6、PD缺陷症的患者其MHb还原率下降(分光光度技术)。三、实验器材及试剂器材:离心机、分光光度计、微量移液器水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管,试管试剂:①0.18mol/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液、②0.4mmol/L亚甲蓝溶液、③0.28mol/L葡萄糖溶液、混合液(等量①+②+③)、生理盐水、抗凝剂、患者静脉血、蒸馏水四、实验步骤1、取静脉血1.8mL于抗凝管(含0.2mL109mmol/L抗凝剂+葡萄糖20mg),混匀2、离心沉淀1000r/min15min3、调整血细胞∶血浆=1∶1,混匀,(调整后全血)4、1ml0.18mol/

7、L亚硝酸钠、1ml0.28mol/L葡萄糖溶液、0.14mmol/L亚甲基蓝液,混匀,得到混合试剂1ml5、取试管3支,标上A、B、S,按下表加入试剂高铁血红蛋白还原试验操作步骤混合试剂/mL0.01//生理盐水/mL/0.01/0.18mol/L亚硝酸钠-//0.010.28mol/L葡萄糖溶液/mL经调整的全血/mL0.10.10.1来回摇动15~20次,置37℃水浴箱静置3h蒸馏水10.00ml10.00ml10.00ml试剂ABSB管为空白管,在波长635nm处,测定“A”管及“S”管吸光度六、实验结果实验结果计算:计算高铁

8、血红蛋白还原率公式:MHb%=(1-A/S)×100%计算出其还原率与正常值比较七、实验分析该患者可能患有先天性镰刀贫血症或蚕豆病。正常的高铁血红蛋白还原率>75%,若计算所得还原率低于75%,且患者姐姐也有类似症状,患者吃过蚕豆后发

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