培养基及其制备.ppt

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1、第二章培养基的制备与灭菌1、培养基的组成？如何选择培养基？2、如何制备培养基？3、如何对培养基进行灭菌？第一节培养基的原材料一、培养基的营养成分及用途光光能自养自养菌氢、硫、氨化能自养1.能源亚硝酸盐、亚铁盐碳水化合物等有机物石油天然气和石油化工产品（如醋酸）异养菌功能：生长、繁殖需要；碳酸气2.碳源淀粉水解糖、糖蜜、亚硫酸盐纸浆废液等石油、正构石蜡、天然气醋酸、甲醇、乙醇等石油化工产品功能：提供能量、构成菌体、代谢产物的物质基础；有机氮：黄豆饼粉、花生饼粉、玉米浆、蛋白胨、3.氮源酵母粉、鱼粉、发酵菌丝体、酒糟

2、水等无机氮：尿素、硫酸铵、氨水、硝酸盐功能：构成菌体、含氮代谢物；磷酸盐、钾盐、钙盐等矿物盐4.无机盐铁、锰、钴等微量元素功能：构成菌体，参与酶的组成，维持酶活性，调节渗透压，调节pH值，维持氧化还原电位；5.特殊生长因子：硫胺素、生物素、对氨基苯甲酸、肌醇等功能：酶的辅助部分，维持生命活动；6．发酵的促进剂与抑制剂发酵培养基中某些成分的加入有利于调节产物的形成，而并不促进微生物的生长，这些物质包括前体、促进剂和抑制剂1）、前体：指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物分子中去，而

3、其自身的结构没有多大的变化，但产物的产量却因加入前体而有较大的提高。如：在青霉素生产中加入玉米浆，青霉素产量可从20u/mL增加到100u/mL，研究发现玉米浆中的苯乙胺被有限结合到青霉素分子中，从而提高了青霉素G的产量。2）、促进剂：指那些既不是营养物又不是前体，但却能提高产量的添加剂。比如在酶制剂发酵过程中，加入诱导物、表明活性剂及其它一些产酶促进剂（比如吐温80、植酸、洗衣粉等）3）、抑制剂：在发酵过程中加入抑制剂会抑制某些代谢途径的进行，同时会使另外一些代谢途径活跃，从而获得人们所需要的某种产物或使正常代

4、谢的某一代谢中间物积累起来。例如：微生物发酵生产甘油中，例如亚硫酸氢钠，它与代谢过程中的乙醛生成加成物。7.水分功能：生化反应均在水溶液中进行二、培养基的类型1.依营养物质的来源分类天然培养基；合成培养基，也称组合培养基（多用于定量研究）；半合成培养基，（用的最多，在部分天然有机碳源、氮源、生长因子的基础上，适当加入一些化学药品）；2.依培养基的物理状态来分：1）固体培养基A、凝固培养基：即遇热可融化，冷却后则凝固的固体培养基B、非可逆性凝固培养基：指有血清凝固成的固体培养基或由无机硅胶配成的凝固后即不能再融化的

5、固体培养基C、天然固体培养基：由天然固体状基质直接制成的培养基，如麸皮，米糠，木屑等D、滤膜：是一种坚韧且带有无数微孔的醋酸纤维薄膜，把它制成圆片状覆盖再营养琼脂或浸有培养液的纤维衬垫上，就形成了具有固体培养基性质的培养条件。2）半固体培养基配置好的液体培养基中加入0.5%左右的琼脂作为凝固剂，形成的培养基称之微半固体培养基。主要用于菌种鉴定，观察细菌运动特征及噬菌体的效价测定等3）液体培养基；培养基中80～90%是水。3.依培养基的用途来分1）、孢子培养基2）、种子培养基3)、发酵培养基4）、补料培养基5）、加

6、富培养基6）、选择培养基7）、鉴别培养基8）、增殖和保存培养基9）、富集培养基10）、测定培养基三、发酵培养基的选择一）、配置培养基的原则1、根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基2、注意各营养物质的浓度和配比3、调节适宜的物理化学条件4、根据培养微生物的目的配置5、尽量使用廉价易得的原料1、生态模拟2、查阅文献3、借助优选法或正交试验法精心设计培养基配方4、实验比较实验的规模一般由定性到定量，由小到大。发酵培养基的用途与要求、成分、配比经实验确定，配制时兼顾原料来源、成本及工艺管理；（举例1，2，3）二）、配

7、置培养基的方法培养基配方举例牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)牛肉膏5克蛋白胨10克NaCl5克水1000毫升pH7.2～7.4(琼脂15～20克)高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)可溶性淀粉20克KNO31克K2HPO40.5克MgSO40.5克NaCl0.5克FeSO40.01克水1000毫升琼脂15～20克pH7.4～7.6察氏培养基(培养霉菌用)蔗糖20克NaNO33克K2HPO41克KCl1克MgSO40.5克FeSO40.01克琼脂20克水1000毫升自然pH无氮培养基(培养自生固氮菌用)葡萄糖

8、10克NaCl0.2克KH2PO40.2克CaSO4·2H2O0.1克MgSO40.2克CaCO35克琼脂20克水1000毫升自然pH伊红-美蓝培养基(检查肠道细菌用)蛋白胨10克K2HPO42克乳糖10克琼脂25克，水1000毫升，pH7.62％伊红水溶液2毫升0.5％美蓝水溶液2毫升将乳糖、伊红、美蓝分别灭菌后，加入灭菌的培养基中摇匀，倒平板。四、原料转换及意义1、节