最新第二章 天然药物化学成分提取分离鉴定方法与技术(色谱法)_PPT课件PPT课件.ppt

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1、第二章天然药物化学成分提取分离鉴定方法与技术(色谱法)_PPT课件碳酸钙（固定相）色素混合液石油醚(流动相）1906年，Tsweet发现色谱分离现象色谱柱色带2“像光谱中的光线一样，色素混合物的不同组分有规律地排列在碳酸钙柱上而彼此分离。”——Tsweet,《德国植物学报》,1906.3柱色谱薄层色谱纸色谱高效液相色谱3）吸附色谱的三要素9溶解能力流动相溶质吸附剂吸附作用竞争在液-固吸附色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于下列三个因素：10吸附作用11硅胶：适用于中性和酸性成分氧化铝：适用于中性和碱性成分活性炭：非极性吸附剂聚酰胺：高分子聚合物,氢键吸附极性吸附剂a、吸附剂

2、（固定相）12硅胶（silica）SiO2XH2O酸性、亲水性吸附剂。结构：内部----硅氧交联结构→多孔结构→范德华力表面----有硅醇基→氢键吸附适用于中性或酸性亲脂性成分的分离。13特性：1）极性吸附剂，“相似者易吸附”物质极性↑，吸附能力↑2）吸水→失活105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力注意：活化温度不宜高，不宜分离碱性物质。氧化铝（aluminiumoxide）极性吸附剂，最适于分离植物中的碱性或中性的亲脂性成分。有酸性、碱性和中性三种规格。吸附特性与硅胶类似，但碱性氧化铝不宜分离酸性物质。14

3、聚酰胺（polyamide）结构：--[CH2-CO-NH-]-n原理：氢键吸附学说15酰氨基与化合物（羟基、羧基及醌基）形成氢键吸附。16用途：分离黄酮类、酚类、醌类、有机酸类及鞣质。影响吸附强弱的因素：1、流动相：水＞甲醇或乙醇＞丙酮＞氯仿＞稀氨水＞甲酰胺;2、分子结构：a、形成氢键数目多，吸附能力强。b、形成分子内氢键，吸附力减弱。C、芳香化合物中，共轭双键多，吸附牢。化合物结构对聚酰胺吸附作用的影响形成氢键的数目成键基团位置双键的数目分子内氢键17课本第33页活性炭（activatedcarbon）非极性吸附剂，对非极性物质具有较强的亲和力，在水中对溶质表现出强的吸

4、附能力。从活性炭上洗脱被吸附的物质时，溶剂的极性越小，洗脱能力越强。18特别适合水溶性物质的分离。b、溶剂（移动相）遵循“相似相溶”及“相似者易吸附”原理：极性吸附剂，溶剂的介电常数愈大，洗脱能力愈强；非极性吸附剂，溶剂的介电常数愈大，洗脱能力愈弱。c、被分离物质遵循“相似相溶”及“相似者易吸附”原理：对于极性吸附剂而言：被分离成分极性大，吸附牢，难以洗脱；被分离成分极性小，吸附力弱，容易洗脱。19一般化合物的极性按下列官能团的顺序增强：—CH2—CH2—，—CH2=CH2—，—OCH3，—COOR，>C=O，—CHO，—NH2，—OH，—COOH四、操作方式1、薄层色谱法

5、（TLC）*定义：将吸附剂均匀的铺在平板上，把要分离分析的样品点加到薄层色谱板上，然后用适当的溶剂系统展开，在一定的条件下显色或直接在日光或紫外光下观察所获得的斑点，从而达到分离、分析、鉴定的目的。201）薄层色谱的吸附剂和支持剂：在选用吸附剂或支持剂时，一般是根据被分离物质的化学性质来选用。当不了解被分离物质的化学性质时，可以先选用最常用的硅胶或氧化铝，如果分离效果不好，可再改用其他的吸附剂或支持剂。21常用的硅胶吸附剂粒径：200-300目种类：硅胶G——硅胶+粘合剂煅石膏硅胶GF254——含有荧光物质硅胶H——不含粘合剂煅石膏硅胶HF254——含有荧光物质22常用的展

6、开剂正己烷、环己烷、四氯化碳、甲苯、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇、甲醇、水23理想的溶剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大，且尽量在0.2-0.8之间。当单一溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。2）薄层色谱的一般操作a、制板b、活化c、点样d、展开e、显色f、计算比移值24操作技术——手工铺板取一份吸附剂和三份水（或另加黏合剂），在研钵中向一个方向研磨混合成均匀糊状（无气泡和结块），均匀涂布在薄层板上。玻璃板层析专用玻璃板，清洗干净用量10×20cm，3g硅胶黏合剂0.3～0.8%CMC-Na溶液，干燥水平台面，室温下自然完全晾干检查表面

7、光滑平整，均匀，无杂质操作要点25裂开的薄层板不能使用!操作技术—活化涂布后的薄层先在室温下阴干，至完全干透后，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。硅胶105℃-110℃30-60min氧化铝105℃-110℃30min26操作技术——点样定量微升毛细管薄层点样毛细管配制样品的溶剂具高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差。（1–5ul）27点样示意图样品溶液的配制点样对照样反应混合