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1、个人收集整理勿做商业用途ELISA实验标本的采集、处理和保存发布时间:2009-10—19ELISA实验标本的采集、处理和保存 能够应用ELISA实验的样本种类很多,有血清,血浆,细胞上清,细胞裂解液,尿液,关节滑液,脑脊液,肺泡灌洗液,各种组织的组织匀浆;采集和处理的方式都不相同.下面就列出了biotnt收集的给类样本的采集、处理和保存方式.方法大多出自文献和试剂盒说明书,部分方法经Biotnt验证过,但有的方法并没有实际操作过,所以,以下方法仅供参考. 一、ELISA实验中血清的采集、处理和保存;1、
2、真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中;2、采血后室温静置1小时;3、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀.4、取上清。分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存24—48小时;—20℃下,可放置保存1个月;—70℃下,可放置保存6个月;5、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。 大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血
3、标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染,因为菌体中可能含有含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜时检测。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。 二、ELISA实验中血浆的采集、处理和保存;1、真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中;2、按1:9加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠),30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集);3、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心5min,,将离心好的匀浆留上清,弃
4、下面沉淀。4、取上清。分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存24—48小时;—20℃下,可放置保存1个月;-70℃下,可放置保存6个月;个人收集整理勿做商业用途5、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。 请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求,建议使用EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。注意事项:制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA,抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性. 三、ELISA实验中尿液的采集、处理和保存;1、采集尿液样本500ul,加入无
5、菌试管中;2、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。3、取上清.分装冻存备用,2—8℃下,可放置保存24—48小时;—20℃下,可放置保存1个月;—70℃下,可放置保存6个月;4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。 四、ELISA实验中脑脊液的采集、处理和保存;1、采集脑脊液样本,加入无菌试管中;2、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀.3、取上清。分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存
6、24-48小时;-20℃下,可放置保存1个月;—70℃下,可放置保存6个月;4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。 五、ELISA实验中细胞上清液的采集、处理和保存;1、采集细胞培养上清液500ul,加入无菌试管中;2、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。3、取上清.分装冻存备用,2—8℃下,可放置保存24-48小时;—20℃下,可放置保存1个月;—70℃下,可放置保存6个月;4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。
7、 六、ELISA实验中细胞裂解液的采集、处理和保存;(需要测蛋白浓度)1、取细胞培养板或细胞悬液,用PBS(PH7.2—7。4)洗涤细胞培养板1-2次。2、通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂(裂解液),使细胞破坏并放出细胞内成份。个人收集整理勿做商业用途3、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心20min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。4、取上清.分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存24—48小时;-20℃下,可放置保存1个月;—70℃下,可放置保存6个月;5、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各
8、种ELISA测定。 七、ELISA实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存;1、10%水合氯醛溶液,腹腔麻醉。2、打开腹腔,另取10ml注射器行下腔静脉采血,尽可能将血放尽。3、在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5ml,分三次灌洗:2ml、1.5ml、1.5ml灌洗。回收率在70%以上.4、将肺泡灌洗液用离心机4℃,1500rpm离心10min。5、取上清.分装冻存备用,2—8℃下,可放置保存24—48小时;—
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