ELISA实验标本的采集、处理和保存.doc

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1、个人收集整理勿做商业用途ELISA实验标本的采集、处理和保存发布时间：2009-10—19ELISA实验标本的采集、处理和保存 能够应用ELISA实验的样本种类很多，有血清，血浆，细胞上清,细胞裂解液，尿液,关节滑液，脑脊液，肺泡灌洗液，各种组织的组织匀浆；采集和处理的方式都不相同.下面就列出了biotnt收集的给类样本的采集、处理和保存方式.方法大多出自文献和试剂盒说明书，部分方法经Biotnt验证过，但有的方法并没有实际操作过，所以，以下方法仅供参考.  一、ELISA实验中血清的采集、处理和保存；1、

2、真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中；2、采血后室温静置1小时;3、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min，,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀.4、取上清。分装冻存备用，2-8℃下，可放置保存24—48小时；—20℃下，可放置保存1个月；—70℃下，可放置保存6个月；5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血

3、标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜时检测。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。 二、ELISA实验中血浆的采集、处理和保存;1、真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中；2、按1:9加入抗凝剂（EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠）,30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集);3、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心5min，，将离心好的匀浆留上清，弃

4、下面沉淀。4、取上清。分装冻存备用，2-8℃下，可放置保存24—48小时；—20℃下，可放置保存1个月；-70℃下，可放置保存6个月;个人收集整理勿做商业用途5、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。 请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求,建议使用EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。注意事项:制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA，抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性. 三、ELISA实验中尿液的采集、处理和保存；1、采集尿液样本500ul，加入无

5、菌试管中；2、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。3、取上清.分装冻存备用，2—8℃下，可放置保存24—48小时;—20℃下，可放置保存1个月;—70℃下，可放置保存6个月；4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 四、ELISA实验中脑脊液的采集、处理和保存;1、采集脑脊液样本,加入无菌试管中;2、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的样本留上清，弃下面沉淀.3、取上清。分装冻存备用，2-8℃下，可放置保存

6、24-48小时；-20℃下,可放置保存1个月；—70℃下，可放置保存6个月；4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 五、ELISA实验中细胞上清液的采集、处理和保存；1、采集细胞培养上清液500ul，加入无菌试管中；2、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。3、取上清.分装冻存备用，2—8℃下,可放置保存24-48小时；—20℃下，可放置保存1个月;—70℃下，可放置保存6个月；4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。

7、 六、ELISA实验中细胞裂解液的采集、处理和保存;(需要测蛋白浓度）1、取细胞培养板或细胞悬液，用PBS(PH7.2—7。4）洗涤细胞培养板1-2次。2、通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂（裂解液），使细胞破坏并放出细胞内成份。个人收集整理勿做商业用途3、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心20min,，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。4、取上清.分装冻存备用，2-8℃下，可放置保存24—48小时；-20℃下，可放置保存1个月；—70℃下，可放置保存6个月；5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各

8、种ELISA测定。 七、ELISA实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存;1、10％水合氯醛溶液，腹腔麻醉。2、打开腹腔，另取10ml注射器行下腔静脉采血，尽可能将血放尽。3、在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5ml，分三次灌洗：2ml、1.5ml、1.5ml灌洗。回收率在70％以上.4、将肺泡灌洗液用离心机4℃，1500rpm离心10min。5、取上清.分装冻存备用，2—8℃下，可放置保存24—48小时；—