茎瘤芥黑斑病菌rdna its区序列研究

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1、茎瘤芥黑斑病菌rDNAITS区序列研究　　摘要：以茎瘤芥（BrassicajunceaCoss.var.tumidaTsenetLee）黑斑病病株为试材，对黑斑病菌5.8SrDNA及其侧翼ITS区序列进行克隆、测序和比对分析。结果表明，5个供试病菌碱基序列同芸薹链格孢的碱基序列相似度达到99.68%，不存在大于3bp的碱基差异；而与甘蓝链格孢和萝卜链格孢的碱基差异较明显，均存在大于3bp的碱基差异，且存在大量的缺失片段。初步确定引起茎瘤芥黑斑病的病原菌为芸薹链格孢。关键词：茎瘤芥（Brassic

2、ajunceaCoss.var.tumidaTsenetLee）；黑斑病；ITS；芸薹链格孢中图分类号：S436.3文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）20-5044-03SequenceAnalysisofITSRegionofrDNAofBrassicajunceaCoss.var.tumidaTsenetLeeBlackSpotDiseaseLIUHong-fang，CHENFa-bo，YANGYong-qiang（LifeScienceandTechnologyInst

3、itute，YangtzeNormalUniversity，Chongqing408100，China）Abstract：TakingBrassicajunceaCoss.var.tumidaTsenetLeeblackspotdiseaseasmaterials，5.8SrDNA8anditsflankingITSwerecloned，sequencedandaligned.Theresultsshowedthatthesequenceof5pathogenwerealmostidentica

4、lwiththatofAlternariabrassicae.Similaritydegreereached99.68%.Therewasnodifferencesmorethan3bpbase.TherewereobviousdifferencesbetweenthesequenceofA.brassicicolaandA.japonica，morethan3bpdifferentbaseandalotofdeletions.Itwasprelimiarilyderterminedthatth

5、epathogencausedtheblackspotdiseaseonBrassicajunceaCoss.var.tumidaTsenetLeewasAlternariabrassicae.Keywords：BrassicajunceaCoss.var.tumidaTsenetLee；blackspotdisease；ITS；Alternariabrassicae茎瘤芥（BrassicajunceaCoss.var.tumidaTsenetLee）是我国特有的作物资源，榨菜是利用其瘤茎为原料

6、，经过专门的加工腌制而成的一种腌菜食品。在我国以“涪陵榨菜”最为著名，与欧洲酸菜、日本酱菜并称世界三大名腌菜[1]。榨菜是重庆三峡库区重要的农业支柱产业之一，是当地农业生产的主要经济来源。黑斑病是茎瘤芥的主要病害之一，发生普遍，主要发生在茎瘤芥的茎和叶片上，此病发生后蔓延迅速，可导致茎瘤芥叶片枯死，植株早衰，甚至腐烂，严重影响茎瘤芥的产量和品质。8研究表明，引起十字花科蔬菜黑斑病的病原菌包括芸薹链格孢（Alternariabrassicae）、甘蓝链格孢（A.brassicicola）和萝卜链格

7、孢（A.japonica）[2]。链格孢属内不同种之间培养性状不稳定，且高度相似和重叠，在实际操作中用传统方法很难鉴定到种的水平[3]。Jasalavich等[4]对十字花科蔬菜上的链格孢属真菌核糖体DNA序列进行分析比较，认为可以基于其进行分类鉴定。目前，关于茎瘤芥黑斑病的研究鲜见报道。本试验以我国茎瘤芥主产区涪陵5个不同种植区的茎瘤芥黑斑病病株为试材，通过对茎瘤芥黑斑病菌rDNAITS序列进行分析，探索基于该区进行茎瘤芥黑斑病菌种水平上分类鉴定的可靠性，以期为该病的进一步研究提供理论依据。1

8、材料和方法1.1供试材料供试材料于2011年12月采自重庆市涪陵区李渡镇、义和镇、焦石镇、马武镇、石胜镇等5个茎瘤芥种植区。选取新发病的叶片作为分离材料，分离到的菌株经单孢纯化后保存于PDA培养基斜面上，分别编号为L1（李渡镇）、L2（义和镇）、L3（焦石镇）、L4（马武镇）、L5（石胜镇）等，置于4℃冰箱中贮存备用。1.2基因组DNA的提取将供试菌株在PDA培养基上培养7～108d，用无菌水洗下菌落表面的菌丝和分生孢子，转接到SN液体培养基中，在25℃、150r/min的条件下培养4～5d后真