最新抗原与抗体的相互作用及免疫学检测ppt课件.ppt

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1、抗原与抗体的相互作用及免疫学检测体液免疫的基础是抗原和抗体分子的结合，这种结合可以是游离形式的，也可以结合在细胞表面。通过抗原抗体的结合继发出各种生理效应，如：溶细胞效应、促吞噬作用、凝集作用、沉淀作用、调节作用等，形成一整套机体体液免疫功能。抗原决定簇与抗体结合部位的结合，要求分子结构有互补性，也因此具有高度的特异性。第一节抗原与抗体反应的特点一、特异性抗原与抗体相互结合只局限于一些大分子表面的特定部位，即抗原决定簇和抗体结合位点之间，且以亲和力的作用方式结合在一起。抗原抗体的结合并没有共价键形成，而是由这些特定部位之间的短程分子力相互作用的结果。这些吸引力

2、只有在极短的距离内才有效。因此抗原决定簇与抗体结合位点在空间上必须处于紧密接触状态，才能产生足够的结合力。这种分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的专一性。在一级阶段之后，继发出现抗原与抗体间进一步交联而形成网络状凝集物，进而出现可见的凝集和沉淀，称为反应的二级阶段。这一阶段是抗原抗体网格生长的阶段，速率要慢的多，且在很大程度上依赖于温度、离子强度等外界条件，但更重要的是需要合适的抗原抗体分子比例。只有当二者的结合价彼此饱和时，才能连接成一个大网格样凝集物，出现凝集或沉淀。抗原抗体凝集（沉淀）反应形成的特点：1、抗原结合价必须在2价以上；2、抗体结合价也必须是2

3、价或2价以上；3、抗原抗体能形成复合物但不一定能形成沉淀；4、抗原抗体结合形成大分子凝集物的前提是要求其结合价彼此饱和；5、当抗原大大过量时，只有溶解状态的抗原抗体复合物，而无沉淀出现，在免疫检测中称为前带现象。第二节抗血清的制备和抗体的纯化抗体产生的特异免疫应答是指机体受外源物质刺激后，产生体液免疫和细胞免疫的过程。在这一免疫应答过程中，除依赖于抗原物质有特定的化学结构外，还依赖于动物机体的免疫应答能力。机体免疫应答能力又受遗传因素的控制及机体的生理状况、抗原物质进入机体的途径和佐剂的使用等因素的影响。由于动物的遗传性不同，同一抗原对不同种动物、同种不同品系

4、甚至不同个体，产生免疫应答的强弱是不同的。因此，在进行动物免疫时，必须选择对该抗原敏感的动物，而且必须是年轻的、健康的。常用的动物有马、羊、兔、鼠和豚鼠。当抗原初次进入具有应答能力的动物体内后，经过一段较长的潜伏期才出现抗体，又经过一段高峰期后，抗体量逐渐下降直至消失。这段时间总的抗体量是较低的，主要成分是IgM，此为机体对抗原的初次反应。但当抗原再次进入该机体时，血清中抗体很快出现，含量也远高于初次反应，其抗体成分主要是IgG，此为再次反应。佐剂在抗血清制备中的作用：由于佐剂有吸附和包埋抗原的“储藏所”作用，延长了抗原在体内的存留时间，便于抗原较长时间的、不

5、间断的刺激机体免疫系统，使初次反应与再次反应结合在一起，其免疫效果更为理想。另外，在佐剂中含有激活巨噬细胞等生理功能的卡介苗类物质，可提高抗原的免疫原性，因此要获得高效价的抗血清，常使用各种类型的佐剂。动物个体的不同组织部位对抗原刺激的敏感性也是不同的。淋巴结、脾脏、足掌、眼睑结膜等是反应敏感部位，也是免疫动物的常用部位。一、动物的免疫1、抗原用量：0.5mg/kg2、佐剂：弗氏佐剂弗氏佐剂的成分和使用3、免疫方法：淋巴结注射、腹部皮下注射、四足掌皮内注射。4、免疫次数：每隔7-10天免疫一次，共需3-4次。第二次免疫后开始测效价。二、抗血清制备和抗体效价测定

6、1、采血方法：兔颈动脉放血、兔心脏取血、兔耳缘静脉放血、鼠心脏取血、剪尾采血、眼窝采血。2、抗血清制备：血液室温放置1-2h或冰箱内4度过夜，血清便可充分析出，用滴管吸出或离心分离取得。分离好的血清加入0.02%叠氮化钠，在4度冰箱内保存可长达半年。3、效价测定：用免疫动物时的抗原浓度作抗体效价测定的抗原浓度。以出现沉淀反应的抗血清的最大稀释倍数来表示抗血清的效价。三、免疫球蛋白的纯化由于抗原抗体的结合具有高度的特异性，在免疫检测中常常直接运用抗血清进行，而无需对抗体进行纯化。随着免疫检测技术的发展，如用铁蛋白、胶体金等标记抗体作免疫电镜观测，用荧光素、酶、同

7、位素标记抗体作组织细胞染色，或对抗原进行定量测定，就必须对抗体进行纯化，但这类的纯化多数是类别的纯化。抗体纯化的方法：1、硫铵盐析法：简便、蛋白质变性较少，33%饱和度的硫铵可以沉淀所有各类免疫球蛋白；缺点是分离的纯度较差，对IgA类抗体来说，浓盐可使其形成二聚体，不宜采用。2、Cohn冷酒精沉淀法：IgA相对分子量160000，IgM相对分子量1000000，故可通过分子筛将两者分开而得到纯品。3、硫铵盐析和DEAE-纤维素柱层析法纯化IgG在pH7.5的溶液中IgG带正电，其他血清蛋白带负电，因此阴离子交换剂DEAE-纤维素可以一次将IgG提纯到很高的纯度

8、4、IgM的纯化方法：18%饱和度硫铵