抗原抗体反应的应用免疫学导论ppt课件.ppt

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1、抗原抗体反应的应用免疫学导论免疫沉淀和免疫凝集免疫沉淀和免疫凝集利用抗原与抗体特异性反应的特性对抗原或抗体进行量或质的测定分析是最经典的血清学方法。溶液中的沉淀反应在体外，当抗体与相应抗原二者浓度比例适当时，会发生免疫沉淀反应，可用于抗原或抗体的定性及定量分析。在液相中形成的沉淀不易观察判断，利用抗原和抗体溶液之间的界面形成的沉淀线便于判断，即环状沉淀试验。环状沉淀试验原理将抗原溶液叠加在细小玻璃管中抗体溶液上面，抗原与抗体在两液交界面处特异性结合，形成白色沉淀环。【评价】：简便快速只能定性敏感性低凝胶中沉淀反应抗原分子和抗体分子在凝胶介质中自由扩散形成梯度

2、浓度，抗原与抗体在比例合适的一定扩散部位相遇形成沉淀线。可用于测定抗原与抗体的相对浓度，也可用于比较不同抗原的特异性、纯度及相互关系。主要有两种方法：单向免疫扩散、双向免疫扩散单向免疫扩散基本原理待测抗原从局部含有相应定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在二者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环大小与抗原的浓度成正相关。方法：将适当浓度的抗体混于琼脂（0.8%~1%）中，琼脂凝固后，打成小孔，加入抗原，抗原由小孔开始向周围扩散，并在小孔周围合适的位置形成沉淀。沉淀环大小与抗原浓度呈正相关。单向免疫扩散❤影响因素1.抗原分子量：与扩散速度、沉

3、淀环反相关2.抗体种类：兔抗血清优于马、羊3.抗体稀释度：抗体浓度大沉淀环小4.扩散时间：抗原含量高，扩散时间长5.扩散温度：4～37℃内温度与扩散速度正相关6.琼脂板厚度：与沉淀环反相关双向免疫扩散【原理】：将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成沉淀线。染色标本图1.抗原抗体双向自由扩散2.24小时出结果3.呈现沉淀线或弧模拟图结果分析：抗原或抗体是否存在；抗原或抗体的纯度：若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统，就能产生相应数量的分离的沉淀线。抗原或抗体相对浓度：抗原浓度越高，形成

4、的沉淀线距离抗原孔越远，抗体浓度越高，形成的沉淀线距抗体孔越远；抗原或抗体相对分子量：抗原或抗体在琼脂内的扩散受分子量影响，分子量大者扩散速度慢，扩散圈小，局部浓度高，因此形成的沉淀圈弯向分子量大的一方，若二者分子量相等，则沉淀线呈直线；抗原性质：观察两个邻近孔的抗原与抗体所形成的两条线是交叉抑或相连，可用来判断该两抗原是否有共同成分。同样的纯抗原a放在两个邻近的孔中，对应抗体放在中央孔中，两条沉淀线在其相邻的末端会互相连接和融合；若两个不同的抗原a和b，则两线互相交叉；若两个抗原有部分相同成分a和ab，则两线除有相连部分以外还有一伸出部分。滴定抗体效价：固

5、定抗原浓度，稀释抗体，出现沉淀线的最高稀释度为该抗体的效价。抗原、抗体相对分子量Ag分子量大于AbAb分子量大于AgAg分子量等于Ab抗原决定簇部分相同抗原决定簇完全相同抗原性质分析两个抗原的抗原决定簇完全不同双向琼脂扩散试验的应用1.检测未知抗原或抗体2.抗原性质分析3.抗体效价滴定4.抗原或抗体纯度鉴定电泳条件下的沉淀反应免疫电泳是利用蛋白质在凝胶中电泳迁移率不同能被分离的特性与免疫扩散结合进行分析的方法。原理：混合的蛋白质抗原在ＰＨ８．６时带负电荷，在电场的作用下，由负极向正极迁移，使混合的抗原组分得以分离。抗体可以通过自由扩散，也可以通过电泳与分离的

6、抗原形成相应的特异性沉淀线，从而提高免疫沉淀的灵敏度。常用的免疫方法有：血清免疫电泳、火箭电泳和对流免疫电泳血清免疫电泳将患者血清和正常人血清分别放在凝胶上近负极端的小孔中进行电泳分离后，在两中抗原之间沿电泳方向挖一条平行的小槽，加入抗血清进行双扩散。-+免疫电泳示意图根据沉淀线的位置及粗细，可分析样品中的抗原含量；根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其它特性，可以确定该复合物中含有某种蛋白质。火箭电泳将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。原理：电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当

7、比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与样本中的抗原浓度呈正相关。注意要点：选择无电渗或电渗很小的琼脂糖，否则火箭形状不规则；若火箭顶部形状呈不清晰的云雾状，提示电泳时间不够，未到达终点；作IgG定量时，由于琼脂中的抗IgG抗体也是IgG，免疫反应中的抗原抗体性质相同，由于电渗作用影响了待测IgG的泳动，火箭峰呈纺锤状。为了抵消电渗作用，可用甲醛使样本IgG上的氨基甲酰化，使本来带两性电荷的IgG只带负电荷，加快泳动速度，出现伸向阳极的火箭峰。火箭电泳的检测灵敏度在μg/ml水平。可采用竞争法放射自显影技术来进行火箭免疫电泳，灵敏度可达

8、ng/ml。对流免疫电泳在pH8.6的琼脂凝胶中，大