最新微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色剖析教学讲义ppt课件.ppt

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1、微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色剖析球菌杆菌弧菌二、实验原理---革兰氏染色革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。二、实验原理---革兰氏染色革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染

2、色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。二、实验原理---革兰氏染色当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被

3、洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。。三、实验器材1、菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌斜面菌种。2、显微镜、载玻片、擦镜纸、酒精灯、接种环、吸水纸、盖玻片、试管、水浴锅。3、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水、双层瓶（香柏油和二甲苯）。四、实验方法和步骤细菌的简单染色1、涂片：用1

4、%盐酸清洁玻片后，在玻片中央滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中，并充分混匀涂成薄膜。2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂面染色1-2分钟。5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的水变无色为止（注：勿冲去菌体）。6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。7、镜检：油镜观察并绘图。四、实验步骤1、菌落形态观察：2、细菌简单染色：3、细菌革兰氏染色。注意：菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规

5、则等特征。染色过程：涂片→干燥→固定→染色（1min）→水洗→干燥→镜检注意事项：涂片：取菌量不能太大干燥：自然干燥水洗：水流不能直接冲在涂菌处滴加少量水挑取菌体涂片干燥固定染色水洗干燥2.革兰氏染色1）、涂片：取清洁玻片一块，在玻片两端1/4处下面用记号笔分别标明S和E（见图示），并滴一滴蒸馏水，分别将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌涂布在相应的区域内。2.革兰氏染色2、干燥与固定：方法同（一）中2，3步骤3、染色：结晶紫染色1-2分钟--水洗--碘液媒染1-2分钟--水洗--酒精脱色15-20秒--水洗--番红复染色2-3分钟--水

6、洗--干燥--镜检记录。染色结果金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果染色结果大肠杆菌革兰氏染色结果染色结果金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果四、实验结果绘图记录观察结果显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数思考题1、在制作涂片中，为什么要进行固定这一步？2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？附：油镜的使用双目显微镜单目显微镜2.油镜的原理油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时，因介质折光率不同，光线将发生散射现象，使射入镜筒的光线很少，物象不清。若在油镜与玻璃片之间加入与玻璃折射率相近的香柏油，则使通过的光线不至因

7、折射而减弱，因此能清楚地看到物象。双层瓶香柏油二甲苯下一个实验实验三、学校公共环境微生物的分离与纯化实验四食用菌原种、栽培种的制备人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。食用菌菌种食用菌的制种程序组织分离接种→母种（一级）接种→→原种（二级）接种→→栽培种（三级）种菇孢子分离经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。一

8、般1支试管菌种可繁殖4~6瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖60~100瓶栽培种。培养培养原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接用于生产。（母种→原种）