最新实验四类风湿因子检测教学讲义ppt课件.ppt

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1、实验四类风湿因子检测类风湿因子的检测类风湿因子（RF）是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。RF最初由Rose等（1984年）在类风湿性关节炎（RA）患者血清中发现。RA患者体内有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要为19S的IgM，也有7S的IgG和IgA，它与天然IgG结合的能力较差，最易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。RF与体内变性的IgG结合形成免疫复合物后可活化补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释放的溶酶体酶、活化肽、胶原酶、前列腺素E2等物质，在细胞因子和炎性粘

2、附分子的参与下，致组织炎性损伤，可使患者发生骨关节炎及血管炎。类风湿因子的病理作用（二）关节型损伤由于类风湿关节滑液中缺少正常的IgG分子，IgG-RF自身结合形成多聚体复合物，IgG-RF多聚体沉积于关节表面激活补体引起关节性损伤。常见的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型，其中IgM和IgA类风湿因子易于检测，而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效价＞80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时，通常提示患者预后不良。IgG型RF：在RA患者血清或滑膜液中IgG型RF的出现

3、与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，此类RF常伴随高滴度的IgM型RF在同一RA患者血清或滑膜液中出现。在正常人及非RA患者中很难检测出IgG型RF．IgG型RF在关节软骨表面的沉积可激活补体引起关节的炎性损伤，因此滑膜液中检测出IgG型RF比血清中检出IgM型RF更具病理意义。RF检测方法一般有胶乳凝集试验、双抗原夹心ELISA法、速率散射比浊法。一般医院主要采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法测定类风湿因子。类风湿因子的检测类风湿因子的主要类型：IgM型特点：高凝集、易于沉淀测定方法为：1、乳胶凝集法2、酶联免疫吸附法3、乳胶免疫比浊法胶乳凝集试验检测RF概念：颗粒性抗原与相

4、应抗体，或表面包被抗原（抗体）的颗粒状物质与相应的抗体（抗原）在电解质存在的条件下相互结合，出现肉眼可见的凝集团现象。正向间接凝集试验—测RF原理（胶乳凝集试验）类风湿因子（RF）是一组抗变性IgG的自身抗体，它能与人或动物的变性IgG结合，而不与正常人IgG发生凝集反应。将处理过的人IgG与胶乳颗粒共价交联，使其吸附于胶乳颗粒载体上，称为致敏胶乳颗粒。当待检血清中有RF时，则与致敏胶乳颗粒上的变性IgG发生反应，出现凝集现象。（正向）间接凝集反应原理示意图（变性IgG）主要的试剂和器材类风湿胶乳诊断试剂RF阴性对照RF阳性对照反应板搅拌棒操作步骤（1）在3块载玻片上分别加一滴RF

5、阳性血清、RF阴性血清及待检血清。（2）加20ulIgG致敏的胶乳于各血清样品中，轻微晃动载玻片混匀。（3）1min后观察凝集反应发生情况结果观察和判断在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒出现，且液体澄清者为RF阳性。若需做半定量测定，可将血清作倍比稀释，重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀释度为RF的效价（滴度）。注意事项（1）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结果可靠（2）注意阴性、阳性对照的设立（3）注意血清及致敏胶乳加样量的比例直接凝集试验（玻片法）--测ABO血型原理天然的颗粒性抗原（如细胞、细菌等）与相应抗体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接凝集反应。玻片法属

6、于定性试验。主要的试剂和器材抗A血型定型试剂抗B血型定型试剂搅拌棒玻片步骤取玻片1块，左上角和右上角分别标上“A”和“B”用采血针采指尖血（左手无名指尺侧），将血滴在玻片的两端。在两血滴上分别滴上抗A标准血清和抗B标准血清，用搅拌棒搅匀。手持玻片，前后旋转摇动，促使血清与红细胞充分混合，用肉眼观察有无凝集。结果观察和判断有凝集时红细胞相互聚集成团，出现大小不等的颗粒。注意事项玻片应洁净、干燥、中性，以防止和减少非特异性凝集。室温低于10℃时，易出现冷凝集而造成的结果。临床意义在美国风湿病协会所规定的类风湿性关节炎诊断标准中，本试验是诊断标准之一。本试验对类风湿性疾病的阳性率约80~

7、90﹪。类风湿因子并非类风湿病所特有，部分正常人及肝炎病人也可呈阳性反应，75岁以上的老年人阳性率较高。据报导，在类风湿病活动期内，（多数报导认为）此期的阳性率为60—80﹪，非活动期的阳性率为20—50﹪。风湿热的阳性率约为10—40﹪，风湿病以外的疾病仍有4—10﹪呈阳性。有10﹪的正常人也呈阳性，并随着年龄的增加而阳性率也升高。尤其是60岁以上者增高较为常见。儿童系统性血管炎的诊治概念血管炎是全身各血管的炎症性疾病，为一全身性疾病，病变可累及各系统、器官的大、中