最新实验动物的基本操作与家兔实验性肺水肿教学讲义ppt.ppt

《最新实验动物的基本操作与家兔实验性肺水肿教学讲义ppt.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验动物的基本操作与家兔实验性肺水肿机能学实验室规章制度1、上课不许迟到，早退，如果有事请请假2、实验课一定要穿白大衣，不许穿拖鞋3、试验中要严肃认真，积极主动，事实求事4、爱护实验器材和仪器，并且珍惜实验动物5、班长负责分发器械并且清点回收6、保持室内清洁，班长负责安排小组清理7、按照要求书写实验报告并且按时上交8、熟读墙上的规章制度一、实验目的1、熟悉和掌握实验动物的基本操作2、学习肺水肿动物模型的复制方法3、观察肺水肿的表现，并分析其发病机制家兔1、抓取称重固定2、颈部手术气管插管颈外静脉插管动脉插管麻

2、醉5ml/kg分离右侧颈外静脉穿两根线备用，远心端为线1，近心端为线2动脉夹夹闭近心端，待血管充盈后，线1结扎远心端远心端剪一“V”形口，静脉插管，线2结扎固定（二次固定）分离左侧颈总动脉穿两根线备用，远心端为线1，近心端为线2线1结扎远心端，待血管充盈后，动脉夹夹闭近心端远心端剪一“V”形口，动脉插管，线2结扎固定（二次固定）静脉插管步骤动脉插管步骤3、输液缓慢输液：5~10滴/分钟，5分钟，恢复家兔的生理状态快速输液：180~200滴/分钟，输液量为100ml/kg，在快速输液即将结束时，实验组需要注射0

3、.1%肾上腺素（1ml/kg），而对照组不需要，继续输液，以10~15滴/分钟速度维持输液。4、观察肺部出现湿啰音或气管插管处出现粉红色泡沫痰时，提示家兔出现肺水肿，即可处死家兔。5、取肺：用止血钳夹闭家兔气管，从剑突处自下往上剪开皮肤，打开胸腔暴露肺脏，小心分离肺和心脏。6、计算肺系数：取出肺之后用滤纸吸干肺表面水分，称出肺重。肺系数=肺重（g）/体重（kg）麻醉时要时刻关注家兔的生理状态，以防家兔死亡。静脉输液装置输液前应排净里面的空气。实验组和对照组的生理盐水输入速度应保持相对一致。第一次使用肾上腺素后

4、肺水肿不明显者，可重复使用，两次间隔大约15分钟。取肺时应夹闭气管，不要损伤肺，防止水肿液流出，影响肺系数的测定。六、注意事项七、课后总结家兔肺水肿的发生机制：1、毛细血管血压增高2、血浆胶体渗透压下降3、肾上腺素的作用免疫酶斑点试验Dot-ELISA实验目的2.了解免疫酶斑点技术的用途。1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法；免疫斑点酶技术的原理硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜均具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。将免疫物质吸附于纤维素膜后，可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。

5、底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色。包被未知抗原NC酶标抗体底物直接法Dot-ELISA包被抗原NC待检抗体酶标抗体底物间接法Dot-ELISA免疫酶斑点技术的特点1）特异性强，假阳性较少；2）敏感性高，NC膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯，检出抗原的敏感性较常规ELISA法高6～8倍；3）试剂用量少，比ELISA法至少节约10倍；4）检测结果可长期保存，便于复查。1.小组为单位实验方法及注意事项2.膜片、抗原、洗涤液、吸水纸在实验台上3.酶标抗体放置在冰箱，使用前取出4.底物临用前配置5.震荡器全

6、班一台,调整好频率后不要乱动方法(直接法)1.取硝酸纤维素膜片,用笔做好标记方便加样;2.将稀释的抗原液2-5μl加于相应格内,室温自然干燥!3.将膜片放入封闭液中震荡封闭15分钟;4.用洗涤液震荡洗涤3次,每次1分钟,吸干;5.将膜片放入稀释好的酶标抗体液体中，震荡15分钟,吸干;6.将膜片放入洗涤液中,震荡涤洗3次×1分钟,吸干;7.将膜片放入底物液中,震荡15分钟左右观察。明显棕色斑点者为阳性实验结果免疫酶斑点技术的应用1.微量抗原的检查;2.抗体分泌细胞、细胞因子产生细胞的筛选;3.自身抗体的检查。