最新实验二-乙肝鉴定教学讲义PPT.ppt

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1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。　　记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，“你看热的，跑什么？”此

2、时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！　　蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅实验二-乙肝鉴定一、背景知识Backgroundknowledge抗原-抗体反应特点特异性可逆性浓

3、度适宜两个阶段抗原-抗体结合免疫复合体形成影响抗原抗体反应的因素Factorsaffectingtheantigen-antibodyreaction离子强度温度酸碱度浓度基于抗体的免疫检测技术Theuseofantibodiesinimmunoassays基于免疫复合体Immunecomplexes凝集反应、免疫沉淀血凝抑制、免疫印迹基于抗原抗体对Antibody–antigenpair免疫标记技术蛋白质芯片技术血凝抑制检验Thehemagglutinationinhibitionassay可用于检验流感，麻疹等病毒可进行定量检测，不会引

4、起病毒扩增免疫印迹Westernblot（Immunoblotting）免疫沉淀Immunoprecipitation(IP)抗原抗体复合物与G/A蛋白结合后形成沉淀而析出IP免疫印记IP-WesternBlotting先用免疫沉淀法纯化样本再用免疫印迹法分离样本最后用免疫荧光技术测定样本放射免疫技术Radioimmunoassay(RIA)竞争抑制Competitiveinhibition免疫荧光技术ImmunofluorescencetechniquesQ:对过敏性紫癜HSP患者的组织切片进行免疫荧光技术检验，可见皮肤血管壁荧光强烈。这

5、是为什么？酶联免疫技术的发展DevelopmentOfAnEnzyme-Linked.ImmunosorbentAssay(ELISA)放射免疫技术1960年免疫荧光技术1941年酶联免疫技术1971年多路阵列技术2007年等离子增强ELISA技术（使用纳米技术，等离子表面共振技术）2012年10月间接法IndirectELISA包被待测抗原，封闭加入一抗，冲洗加入二抗，冲洗加入显色剂，显色检验包被能力差的抗原时结果存在偏差二抗及显色部分可通用，成本较低夹心法SandwichELISA包被特异一抗，封闭加入抗原，冲洗加入酶标抗体，冲洗加入显

6、色剂，显色检验小分子抗原时受表位空间限制结果存在偏差仅需较少数量的抗原，灵敏度高竞争法CompetitiveELISA用抗体孵育待测抗原包被样本抗原，封闭加入抗原抗体复合物，冲洗加入二抗，冲洗加入显色剂，显色价格稍贵适合检验极少数量的待测抗原，灵敏度高。可酶联抗体或抗原。ELISA技术的应用ApplicationsofELISA蛋白定量分析检验过敏源检验特异性抗体检验病毒抗原常见检测例：乙肝两对半结核分歧杆菌抗体HIV抗体实验二乙肝表面抗原检验HepatitisBSurfaceAntigen(HBsAg)Assays二、实验目的Thepur

7、poseofthisexperiment掌握ELISA双抗体夹心法的原理利用ELISA检测试剂盒对乙型肝炎病毒表面抗原进行诊断。三、实验原理Theexperiment'sprinciples待检样本中的抗原与载体上的特异性抗体结合后，可继续结合酶标抗体。加入底物时，底物被酶分解成有色产物。结合的酶量与样本中抗原的量成正比，有色产物的量与酶量成比例，所以有色产物的量与样本中抗原的量直接相关四、实验步骤Theexperimentalmethod1.材料与试剂Materialsandreagents蒸馏水、一次性手套、移液器和无菌吸头、干净的吸水

8、纸、37℃恒温箱乙肝病毒表面抗体诊断试剂盒：预包被反应板1块，酶结合物1瓶，阳性对照1瓶，阴性对照1瓶，浓缩洗涤液1瓶，显色剂A1瓶，显色剂B1瓶，终止液1瓶，封板胶纸2片2.具