最新实验4肝糖原的提取、鉴定与定量教学讲义ppt课件.ppt

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1、实验4肝糖原的提取、鉴定与定量实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。4.熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。5.正确掌握溶液转移的操作。6.正确操作使用分光光度计。实验原理（一）肝糖原的提取、鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与

2、蛋白质等其它成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。实验材料（二）试剂1.鸡肝。2.95％乙醇。3.0.31mol/L(5％)三氯醋酸溶液：称取未潮解的三氯醋酸（C2HCl3O2，163.39）5g，加蒸馏水溶解至100mL。4.0.15mol/LNaCl溶液：称取8.8gNaCl加蒸馏水溶解至1000mL。5.12mol/LHCl：浓HCl原液（36%~38%）。6.12.5mol/L(50％)NaOH：称取NaOH50g，用蒸馏水溶解至100mL。7.碘试剂：碘l00m

3、g和K1200mg溶于50mL蒸馏水中。实验材料8.班氏试剂：称取柠檬酸钠（C5H5Na3O7·5H2O，294.10）17.3g和无水碳酸钠（Na2C03，105.99）100g溶于蒸馏水700mL中，加热促溶。冷却，慢慢倾人17.3％硫酸铜（CuSO4·5H2O，249.68）l00mL，边加边摇。再加蒸馏水至1000mL，混匀，如混浊可过滤取滤液。此试剂可长期保存。9.5.35mol/L(30％)KOH溶液：称取KOH30g，加蒸馏水溶解至100mL。11.标准葡萄糖液(50mg/L)：称取已干燥恒重的无水葡萄糖2

4、5mg，加蒸馏水溶解至500mL。12.17mol/L(90％)H2SO4：量取蒸馏水30mL，加浓H2SO4500mL。13.蒽酮显色剂：称取蒽酮0.20g，用17mol/LH2SO4溶解至100mL。此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用4~5天。操作步骤（一）肝糖原的提取操作步骤注意事项1肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意混匀。由于上清液为水溶液，比重大于95％乙醇，溶液分成两层。加之上清液已4mL多，加上等量乙醇，总量接近9mL，混匀操作比较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。2

5、糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。葡萄糖残基在20个以下的会使碘呈现红色，2030个之间使碘呈现紫色，60个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下（通常812个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。3糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。操作步骤（二）肝糖原定量测定操作步骤操作步骤颅内感染与颅内出血病例分享老年女性，既往有高血压，扩心病病史，否认糖尿病，风湿性性疾病病史。因“发热4天”入院。院

6、外体温最高达38.8℃，伴头痛，畏寒，无恶心，呕吐，咳嗽咳痰等。入院查体T：38.5℃，P：114次/分R：20次/分，BP：164/90mmHg,神志清楚，表情淡漠，反应稍迟钝，颈软，肺部查体无特殊，心率增快，心尖区可闻及杂音，腹部查体发现右上腹，右中腹压痛，神经系统检查未见明显异常。血常规白细胞及中性粒细胞计数增高，RBC,HGB，PLT未见明显异常，尿常规，胸片，上腹部B超，心脏B超未见明显异常入院诊断：脓毒血症：（1）沙门氏菌感染？（2）腹腔深部感染？（3）颅内感染？入院后予三代头孢菌素抗感染，清除炎症介质减轻全

7、身炎症反应治疗。经治疗后患者病情无明显好转，入院第二天患者体温最高达39.9℃，考虑抗感染药物疗效不佳，因考虑沙门氏菌感染可能，联合喹诺酮类抗菌药物抗感染治疗，调整抗生素后体温无明显下降，入院第三天最高体温达39.7℃，予糖皮质激素治疗后患者体温降至正常，但患者神志反而转为嗜睡，头痛程度较入院时加重，且查体发现轻度颈亢，考虑发热原因为颅内感染可能性大。行腰椎穿刺术明确诊断，术中引出血性脑积液，颅内压>400mmH2o，急行头颅CT提示左侧基底节区-鞍区脑出血破入脑室，蛛网膜下腔出血，考虑蛛网膜下腔出血，脑脊液生化示CL：

8、126.50mmol/l,蛋白191.31mg/dl,GLU:1.58mmol/l,脑脊液常规提示细胞总数386000.0M/L，有核细胞数2340.0M/L，单核细胞：8%，多个核细胞：92%。考虑颅内感染可能。转入神经外科后行脑血管造影提示右侧颈内动脉C1段动脉瘤形成，予动脉瘤栓塞术及抗感染治疗后患者病情好转出院