最新实验6-植物总DNA的提取教学讲义PPT.ppt

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1、实验6-植物总DNA的提取实验原理：LiCl最终浓度为2mol/L0.8mol/L直接沉淀大分子RNA（包括rRNA和mRNA）需要注意的是Li离子对反转录酶有抑制作用，而Cl离子能抑制蛋白质合成的起始步骤，所以在mRNA反转录和体外翻译实验前不要使用LiCl沉淀DNA和RNA①所用所有试剂：Tris-CTAB：与RNA结合β-巯基乙醇：防止被氧化Tris饱和酚、氯仿：去蛋白质5LLiCl、无水乙醇、70%乙醇、3mol/LNaAc：使RNA沉淀1×TAE、BW：配制凝胶Gol-rad或gold-view和6×loadingbuffer:前沿指

2、示剂ddH2O②所有材料用具试剂瓶、250烧杯玻璃棒250容量瓶记号笔天平一次性手套钥匙、液氮研钵、冰、线手套、枪、枪头、高压锅、电泳照相系统离心机、混摇机、恒温水浴、电泳仪、电泳槽6.准备好550ul5mol/LLiCl，350ul冷无水乙醇，60ul3mol/LNaAc，加入430ul上清液，静置15-30min，沉淀RNA7.12000rpm离心10min，注意放的方向，抽去上清，RNA沉淀为无色胶体状8.用70%乙醇漂洗两次，切忌快速抽打，开口在通风橱里风干（大概15min），再加入20ul的ddH2O，反复抽打混匀，置于冰中备用。注意

3、事项1、整个实验过程禁止说话，即在没有条件的情况下，尽量创造一个无RNA酶的环境2、实验提取过程尽量缩短时间,尽可能放在冰上3、RNA沉淀为无色胶体状，白色明显沉淀是蛋白质等杂质4、清洗RNA沉淀时确保沉淀不被冲走，确定其溶解在水中5、电泳点样一定要迅速，准确，均匀第八章受体的放射配体结合分析技术受体是细胞膜或细胞内的大分子，它的作用是和细胞外的信息分子呈特异性结合，然后将信息转变为细胞效应，因此受体的功能是识别和信息转导。受体的进一步解释:受体是细胞膜或细胞内的一些能首先与生物活性分子(药物,毒素,神经递质,激素和抗原)相互作用的分子,它们具

4、有三个相互关联的功能:(1)识别和结合,即通过高亲和力的特异过程,识别并结合与其结构上具有一定互补性的分子-配基(2)转导信号:受体和配基相互作用产生信号,传递到效应器,如酶,离子通道等,使它们的活性或构象发生与导致生理效应相适应的变化.(3)产生相应的生物效应:效应的强度与体外实验所测得的激动剂亲和力的大小相应.当然,如果受体所结合的是秸抗剂,则应表现为生物效应的阻断作用.受体鉴定的标准:饱和性高亲和力立体选择性可逆性靶组织的专一性存在竞争性拮抗剂具有内源性配基受体配基结合诱发生理效应受体的分类:神经递质受体激素受体摄取血浆蛋白或转运物质的受

5、体细胞黏附受体直接参与免役功能的受体药物受体毒素受体病原体受体受体的放射配体结合分析是建立在放射性标记配体和受体间的理化结合反应，通过反应给出一定量靶组织或靶细胞中能与配体结合的受体数，用结合位点数表示，另外通过多点测量，经数据处理可给出受体的亲和力（常以平衡离解常数表示），应该指出，受体测定结果应与该受体的结合特性和介导的生物效应作综合分析，作出正确判断。受体与疾病受体与疾病的关系主要表现在两个方面：一方面:受体的变化导致疾病的产生和加重其发展，另一方面:在疾病过程中产生了受体的变化。以受体改变为起因的疾病，称为受体病多种原因引起的很多疾病中

6、所产生的受体的改变，也成为研究这些疾病的防治的主要方面。可分为以下几种。疾病时受体的变化（1）受体数目的变化有很多疾病出现受体数目的变化，其中以胰岛素受体的变化最为显著。例如:肥胖症是一种因胰岛素数目减少而发生的疾病，这种病人单核细胞或脂肪细胞中胰岛素受体数目明显减少而亲和力不变。（2）受体亲和力的变化包括两种完全相反的变化。一种是受体亲和力增加例如:肢端肥大症和胰腺瘤时，胰岛素受体亲和力增加。甲状腺激素使儿茶酚胺受体的亲和力增加等；另一种是受体亲和力降低，例如哮喘病人外周血液淋巴细胞β受体，在最大结合容量减少的同时，伴有亲和力的降低。某些类型

7、的受体的自身抗体亦可使相应受体的亲和力减弱。（3）受体特异性的变化受体的特征之一是具有高度特异性，即特定的受体只与相应的药物或激素等配基相互作用。但是，有时这种特异性并不严格。一种受体除了对本身的配基具有很高的亲和力外，还能以低亲和力与另一种或多种激素或药物等结合，即表现为兼并性。在正常情况下，受体可能完全不与这些配基起反应，但当后者过量时，两者就会相互作用，并产生一定的效应。这种情况称之为受体特异性的外溢。主要发生于某些病理状态。（4）受体的自身抗体多数受体的化学本质是蛋白质，它们都有抗原性。大量实验表明，在受体蛋白质上存在特异的抗原决定簇。

8、但是，由于免疫自稳作用，正常机体并不产生受体的自身抗体。然而，由于遗传缺陷的内因存在，或在感染等外因作用下，机体不能免疫麻痹自身抗原，破坏了原有的免疫