最新噬菌体展示肽在促进药物透过皮肤和血脑屏障中的应用课件PPT.ppt

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1、噬菌体展示肽在促进药物透过皮肤和血脑屏障中的应用体内噬菌体展示技术促进药物透过皮肤屏障促进药物透过血脑屏障展望主要内容体内噬菌体展示技术噬菌如命的噬菌体淘选（Panning）Ruoslahti等于1996年首次将噬菌体肽库直接注射到小鼠体内进行筛选，得到了与小鼠肾、脑血管结合的小肽。体内噬菌体展示技术（InVivoPhageDisplay，IVPD）IVPD＋DrugDelivery＝???噬菌体展示肽促进药物透过皮肤屏障皮肤屏障通过噬菌体文库筛选透皮肽透皮肽对胰岛素透皮的影响透皮肽携带胰岛素透皮的特性透皮肽携带胰岛

2、素透皮的作用机制透皮肽携带其它大分子药物透皮皮肤屏障皮肤的组成表皮基层棘层粒层透明层角质层真皮皮下组织附属器汗腺皮脂腺毛囊皮肤的屏障作用防护机械性伤害防护物理性伤害防护化学性伤害防护生物性伤害防止体内有用物质的丧失药物透皮吸收的主要途径药物从介质中释放表皮皮脂层通过表皮通过附属器角质层细胞间细胞内活性表皮毛囊皮脂腺汗腺真皮毛细血管吸收角质层是药物透皮吸收的主要屏障正常情况下药物通过角质层渗透，通过附属器的渗透可以忽略。角质层的渗透是限速过程。通过噬菌体文库筛选透皮肽Ph.D.-C7Cabdominalskinfrom

3、thebloodPH-1噬菌体（CSSSPSKHC）TD-1（ACSSSPSKHCG）PH-1噬菌体具有穿透皮肤的高效性与特异性。PH-1噬菌体透皮能力？InvitroInvivo一定量的TD-1对PH-1的透皮效果有抑制作用，进一步说明PH-1之所以能够穿透皮肤屏障是展示肽在发挥作用。TD-1对PH-1噬菌体透皮的抑制效应？TD-1(μg)AP-1(μg)AP-1ACNATLPHQCG发现TD-1对对照噬菌体SC的透皮反而增强20%。由于噬菌体衣壳是蛋白质，提示TD-1可能促进蛋白药物穿透皮肤。TD-1对蛋白药物透

4、皮的影响？透皮肽对胰岛素透皮的影响TD-1携带125I-胰岛素应用于大鼠腹部皮肤，2h后血液中的放射性含量都明显高于没有TD-1组，并且持续24h。说明TD-1肯定能够携带125I-INS进入体内。TD-1对125I-胰岛素透皮的影响？TD-1携带胰岛素透皮的生物学功能？胰岛素本身不能透过皮肤，但与TD-1在生理盐水中简单混合即能穿透皮肤，并且产生降糖效果，涂抹糖尿病模型大鼠腹部皮肤2h后血清胰岛素水平开始上升，5h上升达峰值，11h左右回到基础值，相应地2h后血糖开始降低，8h血糖水平降到最低并能维持至11h。透皮

5、肽携带胰岛素透皮的特性应用不同剂量TD-1与70μg胰岛素协同透皮，TD-1携带胰岛素透皮发挥生物学功能具有TD-1剂量依赖性，500μgTD-1己达饱和。剂量依赖性应用500μgTD-1与不同剂量胰岛素协同透皮，TD-1携带胰岛素透皮发挥生物学功能具有胰岛素剂量依赖性，70μg胰岛素己达饱和。序列依赖性以TD-1序列为基础合成不同的TD-1变种，与TD-1比较携带胰岛素透皮能力减少了很多。TD-1两侧的A与G在稳定性方面可能起比较重要的作用，TD-1含有二硫键在协助胰岛素透皮可能起比较重要的作用。作用时效性先用TD

6、-1处理糖尿病模型大鼠腹部皮肤5min，清洗干净后不同的时间点给予胰岛素。洗净后立即给予胰岛素和TD-1与胰岛素协同给予没有多大差别，随给药时间延后效果逐渐降低，15min下降显著，60min则基本失去了作用。TD-1携带胰岛素透皮的作用机制？胰岛素是含有51个氨基酸的小分子蛋白质，分子量为6000，胰岛素分子有靠两个二硫键结合的A链（21个氨基酸）与B链（30个氨基酸），在不同pH下有不同的聚集体形式。TD-1促透机制与其它促渗技术不同化学促渗剂：a经皮扩散—乱角质层结构；离子电渗透法：b低电压促渗—毛囊、汗腺；电

7、致孔术：c高电压促渗—打乱脂质双分子层，跨细胞通道；超声导入法：a和c—打乱脂质双分子层；微针和热穿孔技术：d—微孔logPTD-1＝-3.03具有亲水性TD-1促透机制与化学促渗剂不同TD-1促透机制与和胰岛素直接作用无关放射性与酶法检测均表明TD-1与胰岛素之间没有直接结合。通过荧光闪射检测证实TD-1对胰岛素构象没有影响TD-1对不同结构形式的胰岛素透皮效率没有多大影响。荧光显微镜观察皮肤切片a和e：10μginsulin-FITC＋100μgTD-1b和f：10μginsulin-FITC＋100μgAP-1

8、c和g：10μginsulin-FITCd和h：10μginsulin-FITC＋0.5%SLA/PP给药后2h切片观察，切片深度皮下600μm先用TD-1处理大鼠腹部皮肤5min，清洗干净后，0(i),5(j),15(k)or60(l)min给予10μginsulin-FITC。10μginsulin-FITC＋100μgTD-1大鼠腹部给药