最新固液分离和细胞破碎讲述案例幻灯片.ppt

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1、固液分离和细胞破碎讲述案例目的不仅在于分离细胞、菌体和其它悬浮颗粒（细胞碎片、核酸和蛋白质的沉淀物），还希望除去部分可溶性杂质和改变滤液的性质，以利于后继各步操作。采用絮凝或凝聚的方法，设法增大悬浮液中固体粒子的大小，提高其沉降速度；或采用稀释、加热等方法降低黏度，以利于过滤。第一节发酵液的预处理一、发酵液过滤特性的改变培养液的组成：水70-80%+固体细胞及碎片20-30%(对微生物发酵)+少量的代谢成物+细胞破裂后的内容物+残存的培养基成分1.加热法最简单和价廉的预处理方法，即将悬浮液加热到所需温度并保温适当时间。可有效降低悬浮液的黏度，并加速聚集作用以去除某些杂蛋白；降低悬浮液的最终体积

2、，2.调整pHpH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善其过滤特性。在膜过滤中，发酵液中的大分子物质易与膜发生吸附，通过调整pH值改变易吸附分子的电荷性质，即可减少堵塞和污染；细胞、细胞碎片及某些胶体物质等在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒，有利于过滤的进行。3.凝聚与絮凝采用凝聚和絮凝技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大分子物质的分散状态，使其聚结成较大的颗粒，便于提高过滤速率。另外，还能有效地除去杂蛋白和固体杂质，提高滤液质量。凝聚——指在投加的化学物质（如铝、铁的盐类或石灰等）作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成1mm大小块状凝聚体的过程。絮凝——指在某

3、些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，使胶体颗粒交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。（1）凝聚发酵液中的细胞、菌体或蛋白质等胶体粒子双电层的结构使胶粒之间不易聚集而保持稳定的分散状态。阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为：Al3+>Fe3+>H+>Ca2+>Mg2+>K+>Na+>Li+常用的凝聚剂电解质有：硫酸铝Al2(SO4)3•18H2O(明矾)氯化铝AlCl3•6H2O三氯化铁FeCl3硫酸亚铁FeSO4·7H2O石灰；ZnSO4；MgCO3（2）絮凝絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子

4、（如---COOH）或阳离子（如---NH2）基团以及不带电荷的非离子型基团。它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生桥架联结时，就形成了较大的絮团，这就是絮凝作用。1）有机高分子聚合物，如聚丙烯酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍生物；2）无机高分子聚合物，如聚合铝盐、聚合铁盐等；3）天然有机高分子絮凝剂，如聚糖类胶粘物、海藻酸钠、明胶、骨胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖等。目前最常见的高分子聚合物絮凝剂：有机合成的聚丙烯酰胺（polyacrylamide）类衍生物根据活性基团在水中解离情况不同，可分为三类：非离子型、阴离子

5、型（含有羧基）阳离子型（含有胺基）工业上使用的絮凝剂可分为三类：聚丙烯酰胺类絮凝剂的优点用量少，一般以mg/L计量；絮凝体粗大，分离效果好；絮凝速度快；种类多，适用范围广。聚丙烯酰胺类絮凝剂的缺点存在一定的毒性，特别是阳离子型聚丙烯酰胺，用于食品和医药工业时应谨慎。对于带负电荷的菌体或蛋白质来说，采用阳离子型高分子絮凝剂同时具有降低胶粒双电层电位和产生吸附桥架的双重机理；对于非离子型和阴离子型高分子絮凝剂，要采用凝聚和絮凝双重机理才能提高过滤效果，这种包括凝聚和絮凝机理的过程，称为混凝。（3）混凝4.加入助滤剂一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。悬浮液中大量的细微胶体粒子被吸附到

6、助滤剂的表面上，改变了滤饼结构，降低了过滤阻力。常用的助滤剂有：硅藻土、纤维素、石棉粉、白土、炭粒、淀粉等，最常用的是硅藻土。使用硅藻土时，通常细粒用量为500g/m3；中等粒度用量为700g/m3；粗粒用量为700-1000g/m3。5.加入反应剂加入反应剂和某些可溶性盐类发生反应生成不溶性沉淀，如CaSO4，AlPO4等。生成的沉淀能防止菌丝体粘结，使菌丝具有块状结构，沉淀本身可作为助滤剂，且能使胶状物和悬浮物凝固，改善过滤性能。如发酵液中含有不溶性多糖物质，用酶将其转化为单糖，以提高过滤速率；如万古霉素用淀粉作培养基，发酵液过滤前加入0.025%的淀粉酶，搅拌30min后，再加2.5%硅

7、藻土助滤剂，可提高过滤效率5倍。发酵液中的杂质高价无机离子（Ca2+、Mg2+、Fe3+）杂蛋白在采用离子交换和吸附法提取时会降低其交换容量和吸附能力，在有机溶剂法或双水相萃取时，易产生乳化现象，使两相分离不清。在常规过滤或膜过滤时，易使过滤介质堵塞或受污染，影响过滤效率。在预处理时，应尽量除去这些物质。二、发酵液的相对纯化(一)高价无机离子的去除方法Ca2+——草酸、草酸钠，→形成草酸钙沉淀（注