最新复习基因工程教学讲义ppt.ppt

《最新复习基因工程教学讲义ppt.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、复习基因工程1.1DNA重组技术的基本工具基因工程是指按照，进行严格的设计，并通过DNA重组和转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在水平上进行设计和施工的，因此又叫做。一、基因工程的概念人们的意愿体外DNA重组技术DNA分子可以说这既是概念，也是原理。GAATTCGCTTAAAATTCG限制酶切割DNA分子示意图CTTAAG黏性末端EcoRⅠ中轴线CCCGGG限制酶切割DNA分子示意图GGGCCC平末端SmaⅠCCCGGGGGGCCC中轴线……GA

2、ATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同来源的DNA片段混合将不同种来源的DNA片段连接起来生物A基因片段生物B基因片段……GAATTC…………CTTAAG……酶切……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……同一种用同一种限制性酶处理不同DNA片段，会形成同样的黏性末端，可进行重组。E·coliDNA连接酶：连接

3、黏性末端T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端1.DNA连接酶的种类2.DNA连接酶的作用部位：脱氧核苷酸链上相邻的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键“分子缝合针”——DNA连接酶DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？DNA连接酶DNA聚合酶作用实质催化相邻二个核苷酸形成磷酸二酯键模板不需要需要连接DNA链的方式双链单链作用过程在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链作用结果将DNA双链上的两个缺口同时连接起来合成新的DNA分子作用：具

4、备的条件种类：将外源基因送入受体细胞。对受体细胞的生存没有决定性作用能在宿主细胞内复制并稳定地保存具有多个限制酶切点具有某些标记基因质粒、噬菌体和动植物病毒。使用运载体的目的用它作为运载工具，将目的基因送到宿主细胞中去。“分子运输车”——载体质粒的特点（１）质粒上会存在某些标记基因，标记基因有什么用途？思考质粒：是一种的、、，并具有能力的。裸露结构简单独立于细菌染色体（拟核）之外自我复制双链环状DNA分子鉴别和筛选含有目的基因的细胞基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序一、目的基因的获取二、基因表达载体的

5、构建三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取1、目的基因主要是______________________编码蛋白质的基因例子：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因2、获取目的基因的常用方法（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增也可以是一些具有调控作用的因子初始目的基因的来源1.从生物中直接获取2.人工合成（目的基因的核苷酸序列已知且较简单）补充：基因的结构（1）原核生物基因结构编码区非编码区非编码区编码区上游编码区下游编码蛋白质调控遗传信息的表达（调控程序）…A‥

6、………ATGTGCACGTAGTTA………‥G……T‥………TACACGTGCATCAAT………‥C…启动子终止子编码区非编码区非编码区启动子终止子ATGTGCACGTAGTTATACACGTGCATCAATRNA聚合酶AUGUGCACGUAGUUA启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下

7、来，使转录终止。编码区非编码区非编码区（能编码蛋白质）启动子终止子（2）真核与原核生物基因结构的比较外显子内含子编码蛋白质（不能编码蛋白质）①相同点：都是由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区。②不同点：原核细胞基因的编码区是连续的；真核细胞的编码区是间隔的，不连续的。（2）真核生物基因结构外显子：真核细胞基因DNA中的编码序列，这些序列被转录成RNA并进而翻译为蛋白质。内含子：真核细胞基因DNA中的间插序列，这些序列被转录成RNA，但随即被剪除而不翻译。1、从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同

8、基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库.基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）基因文库提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶切一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接导入受体菌中储存基因组文库a.直接分离法(鸟枪法)如何构建基因文库？某种生物的单链mRNA单链互补DNA双链cDNA片段导入受体菌中储存与载体连接cDN