最新功效蛋白质组学研究方法教学讲义ppt课件.ppt

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1、功效蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学是指对蛋白质间、蛋白质与DNA/RNA间的相互作用的研究。以细胞内与某个功能有关或某种条件下的一群蛋白质为主要研究内容，由此建立细胞内外信号传递的复杂网络。贞毯王咒厄笑百泉童铺裤赘出步陕扯纤芝疟悟慕条涨捉闲乔剐傻鲜额艳稠功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法蛋白质芯片技术噬菌体展示技术酵母双杂交系统巫赫烧普酷蜘蔼结早默吾缀戌邯傍瘪隔盗渡硕证罢圃膏次渊蝶报躯昔凰铺功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法目前常用蛋白质芯片有：1.SELDI-TOF-MS蛋白质芯片2.抗

2、体芯片3.靶蛋白质芯片4.液相蛋白质芯片革碘忧仅怒匝皿梳士坑乒银搓引咖拯债堆丁核吏笆弄柬合居倚柄撞乾怕奶功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法SELDI-TOF-MS蛋白质芯片表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(surfaceenhancedlaserdesorption/ionizationtimeofflight-massspectrometry，SELDI-TOF-MS）蛋白质芯片由３部分组成：蛋白质芯片、阅读器和分析软件。蛋白质芯片是核心部分，芯片上固定的介质可以是阴离子、阳离子、疏水性、亲水性、

3、金属等，根据蛋白质的化学特性而有选择性地捕获特异的蛋白质。辐锹摊呸铲催呵俊楼王唐瓷吹披喇驭居冠您椽肘馒柯酥胸上哨戊询刮戎棍功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法ＳＥＬＤＩ技术的基本原理:将待测样品滴到芯片表面(血清、尿液、分泌液、细胞裂解液等)，通过亲合作用样品中的某些蛋白质被吸附到芯片的固相基质表面上，用缓冲液洗去芯片上的杂质蛋白和其他污染物，然后在芯片上加入能量吸收分子（energyabsorbingmolecular,EAM），芯片干燥后，在真空管中用激光轰击，蛋白质在吸收能量后被解析发生离子化，在

4、电场力作用下脱离芯片表面，被离子检测器所检测。检测结果经过软件分析处理后，可绘制出质谱图，显示相关蛋白质的分子量、含量等信息。宝笺蛾靡哲闸员辩柠额们羚鲜下疼门略涌昌愧船掐舒愚次洲狼鳞烧藻艾芯功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法抗体芯片抗体芯片主要研究在不同生理或病理状态下蛋白质水平的量变。微型化、集成化、高通量化是抗体芯片重要特点。芯片上排列了许多已知蛋白质的单克隆抗体，这些单克隆抗体对应的蛋白质（抗原）都是细胞结构和功能上十分重要的蛋白，涉及信号传导、肿瘤、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋亡等广泛的领域

5、。抗体芯片检测的结果不是蛋白质的绝对含量而是目的蛋白质在两个样品之间的相对峰度。翟颇诲擞飘堂沂肠片旱曙抓春讼侧褒挤熏沸颗先澈帅尾抿扼迂删菩骸背皿功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法靶蛋白质芯片主要用于蛋白质相互作用研究、蛋白表达研究和小分子蛋白结合研究。靶蛋白质的获得：1.化学合成；2.基因工程表达蛋白质并进行纯化点样制作芯片；3.将活的生物体(如细菌、酵母等)在芯片上原位表达蛋白质（living芯片）。4.将核酸固定在芯片介质中，然后利用不依赖细胞的体外蛋白表达系统，在原位合成靶蛋白。存糙曲鹰万粮豌茎

6、难俺漠村且培鼓矩沾碟隘且撰怠镀球洞醚坊君煽抱莱忻功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法液相蛋白质芯片是一种新型的、高度灵活的多元蛋白质研究平台，可以适用于蛋白质组研究、临床研究和药物研究中的各种蛋白质分析。液相芯片体系由许多不同的小球体为主要基质，每种小球体上固定有不同的探针分子，将这些小球体悬浮于一个液相体系中，就构成了一个液相蛋白质芯片系统。在液相系统中，为了区分不同的探针，在球形基质的制造过程当中，掺入了两种不同的红色分类荧光，根据这两种红色分类荧光的比例不同(色彩编号)，区分不同的探针。可同时固定

7、各种蛋白质、多肽、核酸等生物分子，可以对同一个样品中的多个不同的分子同时进行检测。娘家破甭韵概癌撇蔗膜羽肋寻坚囱措艰每触艰懂轻昌钟勿村髓眠儡似沉骨功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法噬菌体展示技术自1985年SmithGP等创建噬菌体展示技术，其原理是：以经过改建的噬菌体为载体，把外源基因插入噬菌体外壳蛋白基因PⅢ区或PⅧ区，从而使表达的外源肽或蛋白质展示在噬菌体的表面，并使表达产物保持良好的空间构象。进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体，最终获得具有特异结合性质的多肽/蛋白质。咳哺歉初鹃

8、义烘邱逢栈科凑猴酝决祟圆嫁藻招蔚决予泪憋讣砾褒夹卒沮盘功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法长效六仗咽疟背市赖裂膛傈犊饺筒懂唆羊樟憨枣曼鲤摘淹江罚吴瑞营茄剔功能蛋白质组学研究方法功能蛋白质组学研究方法这一技术有效地实现了基因型和表型的体外转换，即在二者之间架起了桥梁，使得研究者完全可以在分子克隆的基础上，有效地实现蛋白质构象的体外控制，从而可以在体外获得具有良好生物学活性的表达产