最新全自动生化仪原理与关键技术公共培训教学讲义ppt课件.ppt

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1、全自动生化仪原理与关键技术公共培训生化分析仪是医院检验科进行临床血清、尿液和其他各种体液生化指标测定必不可少的仪器，它是光学、精密机械、电子技术、生物化学和计算机等多项技术相互结合的产物，可以实现临床生化检验的自动化，提高分析效率和结果的正确性。一、概述8/3/20212二、生化分析仪基本分析原理吸收光谱法（分光光度法）透射比浊法8/3/20213紫外、可见吸收光谱用于定量分析的基本方法是：用选定波长的光照射被测物质溶液，测量它的吸光度，再根据吸光度计算被测组分的含量。计算的理论根据就是“吸收定律”，即朗伯－比耳

2、定律。该定律同样适用于红外线吸收光谱法和原子吸收光谱法。8/3/20217透射比浊法一束强度为Io的平行单色光通过一个含有悬浮质点(颗粒大小与光源波长接近)的悬浮液或胶体溶液时，其透射光强度I可用下式表示：I=IoeιL式中，L为悬浮液或胶体溶液在光前进方向上的长度，τ为浊度系数，与悬浮质点的浓度C成线性关系。令τ=2.3KC，则：Lg(Io/I)=KCL与Lamber-Beer定律相似，这是生化分析仪利用透射比浊法进行定量测定的基础。8/3/20218三、生化项目测定方法分类终点法固定时间法动力学法8/3/20

3、219终点法(endpoint)指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称“终点”法，更确切地说应称“平衡”法，这是最理想的分析类型。整个反应达到平衡，由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可。8/3/202110固定时间法(fixedtime)固定时间法又被称为一

4、级动力学法(firstorderkinetic)、初速率法(initialkinetic)、二点动力学法(twopointkinitic)等。在一定的反应时间内，反应速度与反应物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。由于反应物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加(或降低)速度越来越小，这类反应达到平衡的时间很长，且平衡常数不算很大，必需在特定时间段内进行监测。对于任何一级反应，反应开始后在一给定时间t的底物浓度〔S〕为：〔S〕=〔So〕e-kt〔So〕是最初的底物浓度，e是自然对数的底，k

5、是速度常数。8/3/202111在t1到t2的固定时间间隔中，底物浓度的变化量Δ〔S〕与〔So〕的相互关系为：[So]＝(－△[S])/(e-kt1-e-kt2)即在一固定时间间隔中，底物浓度的变化量正比于底物的初浓度。这是一级反应的通性。该段时间内吸光度的增加(或)降低与被测定物的浓度成正比。固定时间法方法学上比终点法要求高，所有影响反应速率的因素如pH、温度及酶量必须在两点分析中保持恒定，并准确定时，必须同时用标准液校正。8/3/202112动力学法(kinetic)动力学法即通常所说的零级动力学法，也被称为

6、连续监测法。指反应速度与被测定物浓度的零次方成正比，也就是与被测定物浓度无关，因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度(△A/min)与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再与酶活性成正比，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。8/3/202113相关的几个术语反应时间：指开始反应（终点法）或反应稳定（动力

7、学法和固定时间法）到反应结束（终点法）或停止对反应监测（动力学法和固定时间法）的时间。孵育时间：仅对双试剂测定有效，指从加入样本到加入第二试剂的时间。延迟时间：仅对动力学法和固定时间法有效，指从加入样本（单试剂）或第二试剂（双试剂）开始反应到反应稳定的时间。8/3/202114四、临床生化项目分类按化学性质分：酶类：包括ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，α-HBDH，LDH，CK，CK-MB,α-AMY，MSO，ADA，ChE等。底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，UREA，C

8、r，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，TBA，NH4+，CO2等。无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl等。特种蛋白类：包括apoA1，apoB，Lp(a)，C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM等。8/3/202115按临床应用分无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，T