最新体外抗菌药物抑菌试验（亦称细菌对药物的敏感试验-简称药38-药学医学精品资料.ppt

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1、最新体外抗菌药物抑菌试验（亦称细菌对药物的敏感试验-简称药38-药学医学精品资料一、概念药物敏感试验是在体外检测抗菌药物对细菌的抑制和杀灭的作用。根据药物的常规剂量在体内所能达到的浓度对细菌的影响，将被检菌株对该药的敏感程度分为三级：敏感、中度敏感／中介度、耐药。二、药敏试验的常用方法K-B纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂稀释法及E-test法试验前面讲过药物对同一菌株，MIC值越小，其抗菌力就越强，K-B法的抑菌圈(环)就越大，细菌对这种药物就越敏感，这是K-B纸片扩散法与稀释法的关系，呈负相关。（一）K-B纸片扩散法是由Kirby和Bauer所创建，此方法属定性试验

2、，是药敏试验中最成熟的方法之一，但操作时影响因素较多，需注意质控。经世界卫生组织推荐统一实验条件，规定了统一用水解洛蛋白培养基及平板大小，培养基厚度，标准菌株、菌龄及菌浓度，操作手法，纸片质量及厚度，药敏纸片之间距离，观察量取结果时间及工具，为各国广泛采用的方法。根据本国国情，卫生部临床检验中心还制订了关于临床微生物实验室室内质控要求。临床具体工作须参照遵守。原理是将定量抗菌药物纸片贴在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度逐渐递减，使纸片周围的敏感细菌受到抑制生长，形成抑菌圈，测量抑菌圈的直径来判定细菌对药物的敏感程度。此法简单易行、价格便宜、药

3、物选择灵活，适用对生长快的细菌进行药敏试验。1水解酪蛋白琼脂（Mueller-HintonAgarMHA）倾注成4mm厚的12～15cm平板，将其保存于4℃冰箱可用1周。2硫酸钡比浊管1.175%氯化钡（BaCl2.2H2O）0.5ml加0.36N(1%)流酸溶液99.5ml,充分混匀，每管4ml其浊度相当于0.5麦氏（McFarlandstandard）比浊管第一管1/2（1.5亿/ml相当于1.5×108CFU／m1）,使用期半年。材料3抗菌素纸片现有商品（阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GEN)、青霉素(PEN)、苯唑西林(OXA)、氨苄西林(AMP)、氨苄西林

4、／舒巴坦(AMS)、呢拉西林(PIP)、头抱唑林(FZN)、头孢呋辛(FRX)、头孢他啶(CAZ)、氨曲南(ATM)、亚胺配南(1MP)、环丙沙星(CIP)、万古霉素(VAN)、克林霉素(CLI)、复方新诺明(SXT)4质控菌金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、大肠埃希菌（ATCC25922）5其它无菌生理盐水、无菌棉拭、镊子、游标毫微米卡尺、消毒小试管、1ml、10ml吸管。操作方法1将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌先接种在血平板或营养平板上，37℃孵育16～24h。2再将菌落接种至营养肉汤中，培养4～6小时后用灭菌生理盐水校正菌液浓度至0.5麦氏标准比浊管(相当于

5、1.5×108CFU／m1)。3用灭菌棉拭子蘸取相当于1.5×108CFU/m1的金黄色葡萄球菌菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后，在MHA平板表面上，从不同方向均匀涂布3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1圈。同样方法涂布大肠埃希菌。平板在室温下干燥3～5min后。根据试验菌株选择抗菌谱。如阳性球菌:金黄色葡萄球菌选择青霉素(PEN)、苯唑西林(OXA)环丙沙星(CIP)、万古霉素(VAN)、克林霉素(CLI)等。大肠埃希菌选用氨苄西林(AMP)、头抱唑林(FZN)、庆大霉素(GEN)、环丙沙星(CIP)、亚胺配南(IMP)等。用无菌镊子将含药纸片，紧贴于

6、琼脂表面，各纸片之间相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm，置37℃孵育18h～24h观看结果。结果纸片周围的细菌受抑制，形成明显的抑菌圈，用游标卡尺测量抑菌环直径的大小记录之。参考表中的质量控制标准，报告敏感(S)、耐药(R)。注意事项标准菌株的抑菌圈应落在表中所示的预期范围内。如果超出该范围，应视为失控，须及时查找原因，予以纠正。培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具的精度、质控菌株的药敏特性等均能影响结果的准确性。（二）肉汤稀释法及琼脂稀释法原理是用水解酪蛋白肉汤(MH)或水解酪蛋白琼脂（MHA）培养基作为稀释

7、剂。按《美国委员会临床实验室标准》作分步倍比稀释抗菌药物，定量加入被检菌株。经培养后观察抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。优缺点稀释法是直接定量地检测抗菌药物在体外对病原菌的抑制或杀灭浓度，有利于临床根据MIC、药物代谢等拟定合理的治疗方案，是目前厌氧菌的最佳测定方法，琼脂稀释法还易于发现污染或耐药突变菌。稀释法是新药开发，体外药敏试验常用的经典参照标准，但操作相对比较烦琐。材料（肉汤稀释法）标准菌株ATCC25923、待测菌株（金黄色葡萄球菌6h菌液）MH肉汤、头孢霉素或青霉素注射粉剂、无菌蒸馏水、0.1mol/L消毒磷酸盐缓冲液、0.