最新FCM原理及临床应用-重医教学讲义PPT课件.ppt

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1、FCM原理及临床应用-重医FCM的工作原理流式细胞仪组成：1.液流系统2.光学系统3.数据处理系统1.液流系统：由样本和鞘液组成。待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经荧光染料标记的McAb染色后置入样品管中，在清洁气体压力下进入流动室形成样本流。在鞘液(sheath)的约束下，通过喷嘴，使其形成单细胞液柱。InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluidFCM检测信号散射光信号前向散射光（fowordscatter,FS）：在激光束正前方的检测器，用于检测细胞或其他粒子物

2、体的表面属性，如大小、形状等。反映细胞颗粒的大小。侧向散射光（sidescatter，SS）：与激光束垂直方向的检测器为侧向检测器，主要用于检测细胞内部结构属性，可获得细胞内超微结构和颗粒性质的参数。反映颗粒的内部结构复杂程度、表面的光滑程度。荧光信号(反映被染上荧光的细胞数量多少）荧光信号每种荧光染料都有特定的激发波长，受激光激发后会产生特定波长的荧光和颜色，如绿色、红色、黄色等。流式细胞仪就是利用不同波长的光学滤片来检测这些特定发射波长的光学信号。荧光信号反映被染上荧光的细胞数量多少。3.数据处理系统：主要由计算机及其软件组成。通

3、过检测散射光及荧光信号对实验数据进行分析存储、显示。具有智能化、自动化特点。免疫荧光标记直接免疫荧光染色法：选用荧光标记的McAb是直接针对细胞表面抗原特异性标志的单一抗体,如抗CD3-FITC抗体、抗CD4-PE抗体、抗CD8-PeCy5抗体。间接免疫荧光染色法：选用特异性McAb与相应抗原结合后，再用荧光素标记的第二抗体进行染色。双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信号。检测时需注意荧光补偿。常用免疫荧光染料组合荧光补偿：每两种荧光信号间不可避免会出现重叠现象，重叠区越大，信号检测的准确性

4、就越差，因此需计算机工作软件进行自动跟踪调节补偿。流式细胞仪的基本功能细胞表型分析(包括细胞膜、胞浆内蛋白表达及核膜成份分析DNA含量及细胞周期分析：DNAcontentanalysis，如细胞凋亡检测细胞分选cellsorting自身免疫性疾病相关HLA抗原分析、自身抗体的检测：如用Hep-2细胞检测抗核抗体。临床免疫学临床血液学临床肿瘤学血栓与止血骨髓和器官移植基础医学研究流式细胞术的临床应用FCM在临床免疫学中的应用(1)淋巴细胞亚群分析T细胞：CD3+CD4+(Th)CD8+(Ts/Tc)B细胞：CD19+NK细胞：CD3-C

5、D16+CD56+(2)淋巴细胞亚群细分T细胞：Ts：CD8+CD28-Tc：CD8+CD28+Th：CD4+CD29+B细胞：B1：CD5+CD19-B2：CD5+CD19+根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同还可将CD4+、CD8+分为CD4+:Th1:CD4+IFN-r+Th2:CD4+IL4+Th0:CD4+IFN-r+IL4+CD8+:Tc1:CD8+IFN-r+Tc2:CD8+IL4+Tc0:CD8+IFN-r+IL4+辅助性T细胞亚群的生物学功能及临床意义Th1细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活

6、化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。Th2细胞：介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化，是IgG1和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。(3)活化淋巴细胞亚群活化总T细胞：CD3+/HLA—DR+静止总T细胞：CD3+/HLA—DR-活化CD4+细胞：CD4+/HLA—DR+活化CD8+细胞：CD8+/HLA—DR+活化诱导分子：CD69白细胞介素2低亲和力受体：CD25CD25+/C

7、D3+：活化T细胞CD25-/CD3+：静止T细胞(4)淋巴细胞功能分析：细胞介导细胞毒试验、细胞内细胞因子的测定自身免疫性疾病变态反应性疾病免疫缺陷性疾病感染性疾病(病毒、细菌、寄生虫感染)免疫治疗监测肿瘤免疫监测移植免疫监测(二)FCM在临床血液学中的应用1.白血病的MIC分型Morphology（形态学）Immunology（免疫学）Cytogenetics（细胞遗传学）白血病分型是选择化疗方案和判断预后的重要依据。白血病免疫分型是MIC分型的重要组成部分，也是对FAB分型的补充，对白血病的诊断、治疗策略制定、预后判断及对白血病

8、发病机制的研究都具有重要作用。免疫分型的临床意义弥补FAB分型的不足诊断其他血液系统肿瘤诊断仅表达个别非本系列相关抗原的急性白血病（LY+—AML、MY+—ALL）急性双系或双表型白血病的诊断骨髓增生异常综合征