最新BrdU染色原理和步骤教学讲义ppt课件.ppt

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1、BrdU染色原理和步骤BrdU染色原理BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）是胸腺嘧啶的衍生物，常用于标记活细胞中新合成的DNA，可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞中新合成的DNA中（细胞周期S期）。这种掺入可以稳定存在，随着DNA复制进入子细胞中。BrdU特异性抗体可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。BrdU特异性抗体可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。活体注射或细胞培养后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性B

2、rdu存在，所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu，以氢链与腺嘌呤结合，不能直接与抗Brdu抗体反应，需经解链使Brdu暴露方能被染色。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等，使DNA双链部分单链化，抗Brdu小鼠单克隆抗体与增殖细胞核内的Brdu结合，再经酶标抗小鼠IgG抗体孵育、呈色，显示进入S期细胞的情况。BrdUstainingprotocolMaterialsandreagentsHydrogenchloride(HCl),1Mand2MBoratebuffer0.1MBorax(sodiumtetraborate)38.1g/liter,pHto

3、9.0Phosphate-bufferedsaline(PBS),pH7.4,with0.1%TritonX-100Method1.Sectionsofparaffin-embeddedtissuesshouldbede-waxedbeforeproceeding.2.IncubateinHCl(1M)for10minonicetobreakopentheDNAstructureofthelabeledcells.3.ThisisfollowedbyHCl(2M)for10minatroomtemperature,then20minat37°C.4.Immediat

4、elyaftertheacidincubations,neutralizebyincubatingthesamplesinboratebuffer(0.1M)for10minatroomtemperature.5.WashinPBS(pH7.4),0.1%TritonX-1003times,5minperwash.6.Continuewithstandardstainingprocedureasdescribedintheimmunohistochemistryandcytochemistryprotocols.注意事项1.BrdU配制方法：10mg溶于10ml双蒸

5、水，4℃下避光保存2.BrdU会肌体造成不可逆损伤，使用时注意安全，避免吸入BrdU粉尘。BrdU染色的进化---EdUEdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。谢谢观看第二十

6、六章治疡剂概述适应证——外科痈疽疮疡体表体内外痈内痈外痈证型阴证（寒证）阳证（热证）局部红肿热痛明显伴全身热象局部红肿热痛不显伴全身寒象外痈治法溃后初起消补成脓托消阳证热毒壅聚而成阴证寒凝痰滞而成仙方活命饮祛邪阳和汤托托里透脓透脓散生黄芪扶正祛邪穿山甲皂角刺补补虚敛疮内补黄芪汤八珍汤扶正五味子儿茶内痈病位大肠肺肺痈咳吐腥臭脓痰肠痈右下腹疼痛内痈代表方剂肠痈肺痈苇茎汤大黄牡丹汤治外痈剂仙方活命饮（《校注妇人良方》）治外痈初起属阳证的代表方使用指征：疮疡初起，红肿热痛，不论脓成与否。体现疮疡内治之“消法”立法清热解毒，行气活血，消肿止痛。病机热毒壅聚，气血失畅。组成金银

7、花、防风、白芷、赤芍、归尾、乳香、没药、陈皮、贝母、天花粉、穿山甲、皂角刺、甘草。金银花穿山甲、皂角刺配伍提要金银花——外痈阳证之要药穿山甲、皂角刺——溃坚透脓(重用为君)张某，男，32岁。咽痛，发烧5天，疼痛剧烈1天。5天前汗出脱衣外感风寒，逐渐感到身体发热，咽部疼痛，在厂卫生室肌注庆大霉素3天，咽痛反而加剧，吞咽有阻挡感，说话含糊不清。查体：体温39.2℃，舌红苔薄黄脉数。右侧软腭及悬雍垂红肿，舌腭弓上方隆起，扁桃体被遮盖，并且推向内下方。实验室检查：白细胞计数16×109/L。咽痛案处方：仙方活命饮加连翘10g、牛蒡子10g、山豆根10g，水煎300毫升，