病理切片技术.ppt

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1、切片技术石蜡切片以石蜡制作的切片，可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米，而石蜡切片不但可以达到这个要求，甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。另外，石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片，而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存，所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中最普遍常用的一种方法。切片机切片机的基本类型有五种，按其结构叫做：（1）摇动式切片机，（2）轮转式切片机，（3）滑动式切片机，（4）推动式（雪橇式）切片机，（5）冰冻切片机。最常用的是轮转式切片机。切片机切片机轮转式切片机：系借转动手摇轮进行切片动作。

2、是靠旋转一个重轮，带动螺纹轴或齿轮，将组织块夹具向前推进，并在上下平面摆动；推动的距离靠一个有刻度的调节器控制，每一梯度为1或2微米。切片前的准备恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。蜡块整修，将蜡块组织面的石蜡用刀修去，使组织全部暴露出切面并修平，以减少切片刀的磨损。将锋利的刀片装入切片刀夹钳内，调整角度和位置后随即紧固，检查切片刀的倾斜度是否正确，倾角过大、则切片上卷；倾角过小则切片皱起，以20°-30°为佳。准备好载玻片、小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。切片的步骤将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切

3、到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。根据需要调整切片厚度。摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。切片的步骤实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中（光亮的一面朝下），立即用毛笔轻轻拉展，以切片无皱褶为最好。

4、如有皱褶时用镊子细心地逐个轻轻拨开，注意不可拨破组织。然后分开每张切片，选取其中最完整的，没有皱褶的切片。贴片（捞片）待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中，以做过防脱处理的一面轻靠切片，将玻片直立提起，趁玻片上仍有少量水份时用毛笔，拨正切片位置。如组织较小，可在玻片上多贴几片或几排，但排列应密集、整齐。烤片用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号，字要写得小而清楚、端正。将附贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2-8小时，使切片牢固地贴附于载玻片上即可进行染色。切片的注意事项切片质量的好坏，除与技术熟练程度和

5、切片机的好坏有关外，切片刀是决定的因素，刀一定要磨得十分锋利。否则在切片时会自行卷起或皱起，或将组织划伤出现刀痕，更不能顺利地将切片切成连续地长条带状。切片刀如有缺口存在，将使制成的切片断裂、破碎，不完整，切片时应时时擦净刀口。切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产生震动。在切制切片的开头阶段如出现切制不良与其他故障，最常见的原因是蜡块或切片刀的松动所致。摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过重过猛，否则可因用力过重而使机身震动，造成切片厚薄不均。遇有硬化过度的脑、肝、脾等组织时，应该轻轻切削，以防组织由于震动形成空

6、洞现象。在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却，这样不仅可保持石蜡的硬度，同时也减少了切片的褶皱，给切片制作带来方便。冰冻切片冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。主要应用于：用于有些水解酶如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等的定位的组织化学方法以及免疫组织化学方法等。用于证明脂肪及类脂和神经组织髓鞘的染色时的切片，这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。用于临床手术的快速病理诊断。神经病理学技术中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Ho

7、rtega氏法和Holzer氏法等。对某些物质所进行的免疫荧光的研究。德国莱卡恒温箱冷冻切片机冷冻切片机工作原理这并非特殊类型的切片机，只不过组织块承托台改换成急速冷冻（约零下20～30℃）装置。这种急速冷冻装置可以有两种形式：一为通过液体CO2，在液体CO2蒸发时，急速吸收大量热而使组织块很快冷冻。另一种为半导体致冷装置，借半导体元件电偶作用急速使组织承托台降温，在１～2分钟内也能达到组织冻结的目的。须注意的是，制作冰冻切片时，不但要使组织块冷冻，同时还应是切片刀冷冻（如利用喷散的多余液体CO2或半导体致冷装置使刀降

8、温）。这两种冷冻装置以半导体冷冻装置使用方便，但需电源和水源。冷冻切片机该机的箱面上有电子控制板，装有即时冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，机器马上进行工作状态。启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉。有照明键一个，启动该键可照明工作间，有利工作及观察组织的冰冻状况。除此之外，箱面的左边有四个按键，两个为快速自动进退键