微生物的培养与应用--课件.pptx

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1、考点40微生物的培养、分离及计数考点41传统发酵技术的应用第十五章微生物的培养与应用高考考法突破考法1微生物的培养与纯化应试基础必备考点40微生物的培养、分离及计数考法2微生物的分离、筛选与计数应试基础必备(1)培养基①概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养物质。②成分：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，还需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。③培养基的制备：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。(2)无菌技术①关键：防止外来杂菌的入侵。②方法：实验室中常用紫外线或化学药物消毒，如用酒精擦拭双手；灭菌的方法主要有灼烧

2、灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。1．微生物的培养(3)实验操作①制备固体培养基a．步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。b．倒平板操作时待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。②纯化菌种a．原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。b．方法：平板划线法、稀释涂布平板法。③菌种的保藏a．临时保存：固体斜面培养基上4℃保存，菌种易被污染或产生变异。b．甘油保存：甘油瓶中－20℃冷冻箱中保藏。2．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)筛选菌株原理：人为提供有利目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物

3、的生长。(2)统计菌落数目的方法①显微镜直接计数法a．原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。b．方法：用计数板计数。c．缺点：不能区分死菌与活菌。②间接计数法(活菌计数法)A．原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。B．计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。C．操作a．设置重复组，增强实验的说服力与准

4、确性。b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。(3)实验流程：土壤取样→制备培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。3．培养基对微生物的选择作用(1)纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：(2)纤维素分解菌的筛选原理以纤维素作为唯一碳源的选择培养基上，刚果红＋纤维素→红色复合物，纤维素分解菌可分泌纤维素酶，分解纤维素使红色消失，出现透明圈。即：可根据透明圈来筛选纤维素分解菌。(3)土壤中纤维素分解菌的筛选流程土壤取样(要在富含纤维素的环境中取样)→选择培养→梯度稀

5、释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。高考考法突破1.对培养基的认识考法1微生物的培养与纯化营养物质含义作用主要来源碳源能提供碳元素的物质构成生物体的物质，异养生物的能源物质无机物：CO2、NaHCO3；有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等氮源能提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物无机物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的成分维生素、氨基酸、碱基等水细胞生命活动必不可少的物质不仅是良好的溶剂，还是结构物质培养基、大气、代谢产物无机盐提供除碳、氮元素以

6、外的各种重要元素，包括某些大量元素细胞内的组成成分；生理调节物质；某些化能自养型细菌的能源；酶的激活剂等培养基（）(1)培养基的成分(2)培养基的分类划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产固体培养基加凝固剂，如琼脂对微生物分离、鉴定等用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，用来抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养和分离出特定微生物(如分离细菌和真菌，可以在培养基中加入青霉素)鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌

7、(若有，则菌落呈黑色并带有金属光泽)(3)培养基的配制原则①目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等选择原料配制培养基，如培养自养型的微生物就不用加入有机营养物质。②营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。③pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同。2.无菌技术操作的方法概念常用方法应用的范围消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法：在100℃下煮沸5～6min一般物品巴氏消毒法：70～75℃煮30min或在80℃煮15min一些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用

8、氯气消毒水源等紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min接种室灭菌使