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1、实用流式细胞技术及其样品处理FACSAria(FACSDiva)流式细胞术基本原理在不同领域的应用样品及其前处理一、 流式细胞术基本原理OrangeTimeTimeTimeTimeFSCGreenSSCTimeRedGreenDataProcessorSSCFSCOrange最大特点：单细胞水平的分析BlockingcapillaryDetector单细胞液流柱的形成InjectorTipSheathfluidSheathfluid利用流式细胞术可以获得哪些信息细胞的相对计数、绝对计数细胞成分的相对定量、绝对定量单参数或多参数细胞表面、细胞内成分可溶性成分流式分子表型流式细胞术可以产生哪些信号
2、细胞的物理参数：散射光细胞的理化参数：荧光散射光信号FSCSensorLaserSSCSensor前向角散射（FSC）：与球形细胞直径的平方密切相关。侧向角散射（SSC）：对细胞膜、细胞质的折射率敏感。对细胞质内较大的颗粒也有反映。用来获取有关细胞内部精细结构和颗粒性质的有关信息。neutrophilsbasophilseosinophilsmonocyteslymphocytesneutrophilsmonocyteslymphocytesLaserFSCSSCMonocyteLymphocyteGranulocyteFSCSSC荧光信号LaserFSCSensorFluorescenced
3、etector单个细胞的总荧光强度单标样品Laserlogfluorescenceintensitycellnumber42%positiveAntigenA58%negativeAntigenAFL2FSC双标样品LaserLogfluorescence(green)Logfluorescence(red)A+(%)B+(%)A+B+(%)neg.(%)FSCFL1FL2HistogramDotPlotContourPlotPseudo3-dimensionPlot3-dimensionPlotUnimodalorbimodal道数（channel）荧光强度坐标不等距“Particle”ca
4、nbeusedasamoregeneraltermforanyoftheobjectsflowingthroughaflowcytometer.“Event”isanythingthathasbeeninterpretedbytheinstrument,tobeasingleparticle,correctlyorincorrectly.Eachmeasurementfromeachdetectorisreferredtoasa“parameter”.Dataarestoredinso-calledflowcytometrystandard(FCS)format.Datastoredonone
5、cytometermaynotbeanalyzableonsoftwarefromanothercytometer.细胞分选分选纯度分选产率厂家、型号、激光器、滤光片、软件BectonDickinson(MaxwellW.BectonandFairleighS.DickinsonBD)：FACS“FluorescenceActivatedCellSorter”FACSI,II,III,IV,400,420,440,FACStar,Vantage,DiVa,Aria:Sorters.FACSAnalyser,can,Calibur*,LSR,Canto:‘Benchtop’.OtherManuf
6、acturers:Partec,Ortho(Cytofluorograph,Cytoron),Skatron,Partec,Dako(Galaxy),Cytomation(MoFlo).July2002:DakoCytomation:Cyanbenchtop.460500540460500540460500540SP500LP500BP500/50LongpassShortpassBandpass滤光片二、 在不同领域的应用细胞周期分析细胞功能分析细胞凋亡分析免疫学领域其他领域（一）细胞周期分析G0/G1SG2/MPI#ofEvents02004006008001000PIAneuploidp
7、eakDNAindex1.21CellularDNAcontent必须用RNase去除RNADNA合成---BrdUIncorporation凋亡细胞BrdU+或S期细胞G0/G1期细胞G2/M期细胞增殖细胞核抗原（Proliferatingcellnuclearantigen，PCNA）:参与DNA复制和核酸的切补修复（excisionrepair）的一种蛋白增殖相关抗原（proliferati
