基因工程基本操作的四个步骤.ppt

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1、1.2基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取1、目的基因主要是指______________________编码蛋白质的结构基因2、获取目的基因的常用方法有哪些?（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成请阅读P9第一和二两段(一)从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库基

2、因文库基因组文库（某物种全部基因）部分基因文库（如:cDNA文库）1.基因文库2.基因文库的构建方法与目的基因的获得①鸟枪法：供体细胞中的DNA许多DNA片段运载体限制酶与载体连接载入受体细胞（基因组文库）产生特定性状导入外源DNA扩增目的基因分离(直接分离法)(一)从基因文库中获取目的基因②反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA杂交双链(单链RNA/单链DNA)单链DNA反转录酶核酸酶H2.基因文

3、库的构建方法与目的基因的获得DNA聚合酶双链DNA(目的基因)（cDNA文库）③根据已知的氨基酸序列合成DNA法：根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成2.基因文库的构建方法与目的基因的获得上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法操作简便广泛使用工作量大，

4、盲目，分离出来的有时并非一个基因专一性强操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高专一性最强仅限于合成核苷酸对较少的简单基因思考:为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗?PCR技术—聚合酶链式反应概念：原理：前提：PCR扩增仪DNA双链复制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术四种脱氧核苷酸dNTP一对引物热稳定DNA聚合酶(Taq酶）模板DNA(含有目的基因)温度控制条件：④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增

5、循环的次数）⑤结果：使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增指数2n⑥过程：a、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____

6、复制___________的核酸合成技术③条件：_______________________、_______________、___________(做启动子)、___________.前提条件：②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：选修1P60多聚酶链式反应体外特定DNA片段DNA双链复制已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物DNA聚合酶指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增(二)利用PCR技术扩增目的基因