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1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。一血糖定量测定(GOD-PAP法)原理动物血液中的糖主要是葡萄糖,正常情况下,其含量较恒定。健康家兔的血糖水平为80~120mg／dL。(dL代表100mL。)GOD-PAP法,即氧化酶-过氧化物酶法是近几年临床血糖定量测定普遍采用的方法。该法测定血糖依据的酶反应为:醌亚胺在A480nm~A550nm波长有最大吸收,所产生颜色的深浅与血清中葡萄糖的量成正比。在同样条件下,测定葡萄糖标准液和样品的光吸收值,即可求出样品中葡萄糖的含量。试剂和材料(1)血糖试剂盒:北京中生生物工程高技术公司产品,含有:葡萄糖氧化酶(G
2、OD)>13U／mL;过氧化物酶(POD)>0.9U／mL;磷酸缓冲液:磷酸盐11mmol／L,酚100mmol／LpH7.0;4一氨基安替比林0.77mmol／L;葡萄糖标准液:100mL／dL。使用时,将90mL磷酸缓冲液与10mL酶制剂混匀制成的溶液为工作液。2瓶磷酸缓冲液和2瓶酶制剂。(2)样品:(兔血清)每一试剂盒装有操作取3支试管,按下表加入试剂。资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。分别将各试管内容物摇匀,37℃保温10~15min(避免阳光直射)。用光程为1.0crn的比色杯,在A480~A550波长进行比色。将测得的A标准、A
3、样品数据代入下述公式,计算出样品中葡萄糖的浓度。式中C:样品中葡萄糖的浓度;A标准为葡萄糖标准液在A480~A550波长的光吸收值;A样品:待测样品在A480~A550波长的光吸收值;C标准为葡萄糖标准液中葡萄糖的浓度。注意事项(1)试剂中含迭氮铵做为稳定剂,勿与皮肤、黏膜接触。(2)制备样品时,血清应在收集血样后1h内与细胞分离。加糖原酵解抑制剂(NaF,KF)后,15~25℃可贮存24h,4℃在密闭的容器中可贮存7d。二蒽酮比色定糖法原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮能够和游离的己糖或多糖中的己糖基,戊醛糖及己糖醛酸反应,反应后溶液呈蓝绿色,在620nm处有
4、最大吸收。资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。蒽酮可与其它一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。当样品中存在含较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色。对于以上特定的糖类,反应较稳定。本法多用于测定糖原含量,亦可用于测定葡萄糖含量。试剂(1)蒽酮试剂:取0.2g蒽酮溶于100mL80％(V／V)硫酸中,当日配制使用;(2)标准葡萄糖溶液(0.1mg／mL):100mg葡萄糖用蒸馏水定容至1L(可滴加几滴甲苯作防腐剂);(3)标准糖原溶液(0.1mg／mL):100mg糖原用蒸馏水定容至1L(可滴加几滴甲苯作防腐剂)。操作(1)制作标准曲线:取干试管
5、6支,依次加入标准糖溶液0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mL,并依次用蒸馏水补足体积到1mL,置冰浴中5min,各管均加入蒽酮试剂4mL,沸水浴准确煮沸10min,自来水冷却,室温放置10min,比色测定A620。(2)样品含糖量测定:吸取1mL无蛋白糖溶液置试管中,浸于冰浴中冷却,再加入4mL蒽酮试剂,沸水浴中煮沸10min,取出后自来水冷却后比色,其它条件与做标准曲线相同,测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。计算式中A:为样品稀释后的体积;C:为标准曲线查出的糖含量(mg／资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。mL);W:为样
6、品的重量(mg)。三血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)原理血清经无水乙醇处理,蛋白质被沉淀,胆固醇则溶在无水乙醇中。在乙醇提取液中加磷硫铁试剂,胆固醇和试剂生成紫红色化合物,呈色度与胆固醇含量成正比,可用比色法测定。试剂(1)10％三氯化铁溶液:10gFeCl3·6H2O(A.R)溶于磷酸(A.R),定容至100mL。贮于棕色瓶中,冷藏,可用一年;(2)磷硫铁试剂(P-S-Fe试剂):取10％FeCl3液1.5mL于100mL棕色容量瓶内,加浓硫酸(A.R)至刻度;(3)胆固醇标准贮液:准确称取胆固醇(C.P)80mg,溶于无水乙醇,定容至100mL;(4)胆固醇标准溶液:将
7、贮液用无水乙醇准确稀释10倍即得。此标准液含0.08mg／mL胆固醇。操作(1)吸取血清0.1mL置干燥离心管内,先加无水乙醇0.4mL,摇匀后再加无水乙醇2.0mL,摇匀,10min后离心(3000r／min,5min),上清液备用。(2)取干燥试管3支,编号,分别加入无水乙醇1.0mL(空白管)、胆固醇标准溶液1.0mL(标准管)、上述乙醇提取液1.0mL(样品管),各管皆加入磷硫铁试剂1.0mL,摇匀,10min后,分别转移至0.5cm光径的比色杯内,测A505。计算资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，
