第五章-经典免疫学技术.ppt

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1、第五章经典免疫学技术第一节沉淀反应第二节凝集反应第三节补体参与的抗原抗体反应第四节中和反应第五章经典免疫学技术第一节沉淀反应第二节凝集反应第三节补体参与的抗原抗体反应第四节中和反应第五章经典免疫学技术第一节沉淀反应根据抗原与抗体反应的条件及附加因素，沉淀反应可分为两种主要形式：1．溶液中沉淀反应2．凝胶中沉淀反应第一节沉淀反应根据抗原与抗体反应的条件及附加因素，沉淀反应可分为两种主要形式：1．溶液中沉淀反应2．凝胶中沉淀反应1．溶液中沉淀反应（Precipitationreactioninsolution）是指在清彻透明的液体中，呈溶解状态的抗原与抗体

2、在试管内或凹玻片上混匀，可凝聚成为肉眼可见的絮状或颗粒状的不溶性沉淀物。溶液中沉淀反应盐溶液抗原+抗体———沉淀20~56℃、pH6～8抗原：沉淀原抗体：沉淀素1．溶液中沉淀反应（Precipitationreactioninsolution）（1）环状沉淀试验（2）免疫比浊法（3）免疫沉淀技术（1）环状沉淀试验环状沉淀试验（ringprecipitationtest）或毛细管内沉淀反应（precipitationincapillarytube）（2）免疫比浊法(immunonephelomytry）可溶性的抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原

3、抗体复合物，使反应液出现浑浊。复合物的量与浊度成正比。与标准品比较即可计算出样品中的抗原或抗体含量。免疫沉淀技术免疫共沉淀GSTpull-down技术第一节沉淀反应根据抗原与抗体反应的条件及附加因素，沉淀反应可分为两种主要形式：1．溶液中沉淀反应2．凝胶中沉淀反应2．凝胶中沉淀反应（Precipitationreactioningel）1968年Ouchterlong发明的。即将抗原抗体溶液放在琼脂凝胶板上的小孔中，使它们彼此对向扩散，在抗原抗体相遇的地方形成沉淀线。2．凝胶中沉淀反应此沉淀线的突出性质是：特异性抗原抗体不能通过；与沉淀线无关的抗原和抗体分

4、子则可自由通过此沉淀线。2．凝胶中沉淀反应（1）单相免疫扩散试验（2）双相免疫扩散试验（3）免疫电泳（4）火箭电泳试验（5）免疫印迹技术单相免疫扩散试验双相免疫扩散试验（3）免疫电泳（immunoelectrophoresis）（4）火箭电泳试验又称Westernblotting电泳印渍及检测（5）免疫印渍技术（immunoblotting）免疫印渍第一节沉淀反应第二节凝集反应第三节补体参与的抗原抗体反应第四节中和反应第五章经典免疫学技术第二节凝集反应1．直接凝集反应2．间接凝集反应3．桥梁凝集反应4．共同凝集反应第二节凝集反应1．直接凝集反应2．间接凝集

5、反应3．桥梁凝集反应4．共同凝集反应1．直接凝集反应（directagglutination）是将细菌或红细胞与其相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。1．直接凝集反应（1）微生物凝集反应如诊断伤寒病的肥达氏（Widalreaction）反应（2）同种红细胞凝集反应如检查血型的血细胞凝集现象第二节凝集反应1．直接凝集反应2．间接凝集反应3．桥梁凝集反应4．共同凝集反应2．间接凝集反应（indirectagglutination）用可溶性抗原（或抗体）包被在一种与免疫无关的、具一定大小的不溶性颗粒（即载体颗粒，如：乳胶颗粒或红细胞）的表面，然后与相应抗

6、体（或抗原）作用，在有适宜电解质存在的条件下，结合产生的凝集现象。2．间接凝集反应正向间接凝集反应：将抗原先吸附在载体表面，然后与相应抗体结合产生的凝集反应。反向间接凝集反应：将特异性抗体先吸附在载体表面，然后与相应抗原结合产生的凝集反应。既可检测抗原，也可检测抗体；方法简便、敏感。正向间接凝集反应此方法对检测微量抗原具有较高的敏感性。而且由于相关病原体的抗原成分一般情况下比血清抗体出现早，所以可用于某些传染病如钩端螺旋体抗原和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)或原发性肝癌AFP的检测等。反向间接凝集反应第二节凝集反应1．直接凝集反应2．间接凝集反应3．桥梁凝

7、集反应4．共同凝集反应3．桥梁凝集反应又称Coombs抗球蛋白试验。此试验用于检测不完全抗体。第二节凝集反应1．直接凝集反应2．间接凝集反应3．桥梁凝集反应4．共同凝集反应4．共同凝集反应又称协同凝集反应。指由两种颗粒成分相互作用而发生的凝集反应。4．共同凝集反应（1）细菌抗体与携带蛋白A的金黄色葡萄球菌CowanⅠ系致敏，即通过其IgG的Fc段与蛋白A结合，再与相应细菌发生凝集反应。（2）玫瑰花结试验：主要用于研究各种淋巴细胞特性。E花环形成示意图B细胞EA、EAC玫瑰花环形成示意图淋巴细胞的分离玫瑰花结淋巴细胞与红细胞形成玫瑰花结的主要模式玫瑰花结的

8、类型红细胞的类型及处理淋巴细胞类型E花结绵羊红细胞T、50%NKE