第七章经典免疫学技术黑白般ppt课件.ppt

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1、第七章经典免疫学技术1经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应2经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应3沉淀反应可溶性抗原与相应抗体在液相或凝胶中特异性结合后，形成的免疫复合物在一定条件下出现的蛋白质析出现象。4沉淀反应原理沉淀原（precipitinogen）沉淀素（precipitin）5沉淀反应的种类1．溶液中沉淀反应2．凝胶中沉淀反应6溶液中沉淀反应是指在清彻透明的液体中，呈溶解状态的抗原与抗体在试管内或凹玻片上混匀，可凝聚成为肉眼可见的絮状或颗粒状的不溶性沉淀物。7絮状沉淀试验康氏反应（K

2、ahn‘stest）:心肌提取的类脂质抗原+反应素（Aegagin）敏感性高，特异性差，易出现假阳性。(1991年首批淘汰)性病研究实验室法(venerealdiseaseresearchlaboratory，VDRL)心拟脂及卵磷酯+反应素（Aegagin）不需加热的血清反应素试验(unheatedserumreagin)心拟脂及卵磷酯+氯化胆碱+反应素（Aegagin）8反应最适比测定（1）抗原稀释法（Dean-Webb法）（2）抗体稀释法（Ramon法）（3）方阵法或棋盘格滴定法（checkerboardtitration）9环状沉淀试验（ringprecipita

3、tiontest）Ascoli于1902年建立用于检查兽类内脏、毛皮浸液等标本中的炭疽杆菌抗原10免疫比浊法（immunoturbidimetry）优点：校正曲线稳定，简便快速，易于自动化，无放射性核素污染缺点：特异性、灵敏度稍差11免疫比浊法的分类（1）透射比浊法（transmissionturbidimetry）（2）散射比浊法（nephelometry）（3）免疫胶乳浊度测定法（immunolatexturbidimetry）（4）速率抑制免疫比浊法（rateinhibitionimmunoturbidimetry）12免疫沉淀技术（Immunoprecipitat

4、ionassay）13免疫共沉淀技术（Co-Immunoprecipitationassay）14GSTPULLDOWN15小G蛋白结合活性检测16免疫共沉淀的局限性（1）难以检测低亲和力和短暂的相互作用（2）不能够确切分辨第三种蛋白的桥联作用（3）灵敏度不如亲和色谱高（4）需对未知蛋白的相关信息有一定了解17染色质免疫共沉淀18RNA免疫沉淀在生理状态下对结合在RNA上的蛋白质进行免疫沉淀，然后通过基因芯片或者其它手段检测目的RNA的含量。19免疫沉淀中抗体的选择20免疫共沉淀技术的应用21单相免疫扩散试验（singleimmunodiffusion）22双向免疫扩散试

5、验（doubleimmunodiffusion）23免疫电泳（immunoelectrophoresis）24对流免疫电泳（counterimmunoelectrophoresis）25火箭免疫电泳（rocketimmunoelectrophoresis）26交叉免疫电泳（crossedimmunoelectrophoresis）27免疫固定电泳（immunofixationelectrophoresis）首先将蛋白质抗原进行电泳分离，电泳后直接将抗体加于蛋白质区带表面，抗体与对应的抗原就会直接结合，形成的复合物嵌于固相支持物中。28免疫印渍技术（immunoblotti

6、ng）29经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应30凝集反应（agglutination）颗粒型抗原与相应抗体结合后，在有适当电解质存在下，抗原与抗体充分反应相互聚集，形成肉眼可见的凝集团块。凝集原（agglutinogen）凝集素（agglutinin）31凝集反应特点1．凝集反应中抗原颗粒较大抗原，长期静置或离心沉淀可自然下沉２．凝集反应中凝集块主要由抗原形成，而在沉淀反应中，沉淀物主要由抗体形成３．凝集反应：需稀释免疫血清中的抗体，使抗体分子不致于过多；沉淀反应：为了不使抗原过多则需稀释抗原32直接凝集反应（directaggl

7、utination）肥达氏反应（Widalreaction）：一种试管凝集反应。用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原，与病人血清作定量凝集试验，以测定患者血清中无相应抗体存在，作为伤寒、副伤寒诊断的参考。33血型检测细胞膜表面血清中A型：A抗原抗B抗体B型：B抗原抗A抗体AB型：A和B抗原无抗A和抗B抗体O型：无A和B抗原有抗A和抗B抗体34间接凝集反应（indirectagglutination）35反应类型（1）正向间接凝集反应（forwardindirectagglutination）（2）反向间接凝集反