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时间:2020-10-04
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1、第七章经典免疫学技术1经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应2经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应3沉淀反应可溶性抗原与相应抗体在液相或凝胶中特异性结合后,形成的免疫复合物在一定条件下出现的蛋白质析出现象。4沉淀反应原理沉淀原(precipitinogen)沉淀素(precipitin)5沉淀反应的种类1.溶液中沉淀反应2.凝胶中沉淀反应6溶液中沉淀反应是指在清彻透明的液体中,呈溶解状态的抗原与抗体在试管内或凹玻片上混匀,可凝聚成为肉眼可见的絮状或颗粒状的不溶性沉淀物。7絮状沉淀试验康氏反应(K
2、ahn‘stest):心肌提取的类脂质抗原+反应素(Aegagin)敏感性高,特异性差,易出现假阳性。(1991年首批淘汰)性病研究实验室法(venerealdiseaseresearchlaboratory,VDRL)心拟脂及卵磷酯+反应素(Aegagin)不需加热的血清反应素试验(unheatedserumreagin)心拟脂及卵磷酯+氯化胆碱+反应素(Aegagin)8反应最适比测定(1)抗原稀释法(Dean-Webb法)(2)抗体稀释法(Ramon法)(3)方阵法或棋盘格滴定法(checkerboardtitration)9环状沉淀试验(ringprecipita
3、tiontest)Ascoli于1902年建立用于检查兽类内脏、毛皮浸液等标本中的炭疽杆菌抗原10免疫比浊法(immunoturbidimetry)优点:校正曲线稳定,简便快速,易于自动化,无放射性核素污染缺点:特异性、灵敏度稍差11免疫比浊法的分类(1)透射比浊法(transmissionturbidimetry)(2)散射比浊法(nephelometry)(3)免疫胶乳浊度测定法(immunolatexturbidimetry)(4)速率抑制免疫比浊法(rateinhibitionimmunoturbidimetry)12免疫沉淀技术(Immunoprecipitat
4、ionassay)13免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitationassay)14GSTPULLDOWN15小G蛋白结合活性检测16免疫共沉淀的局限性(1)难以检测低亲和力和短暂的相互作用(2)不能够确切分辨第三种蛋白的桥联作用(3)灵敏度不如亲和色谱高(4)需对未知蛋白的相关信息有一定了解17染色质免疫共沉淀18RNA免疫沉淀在生理状态下对结合在RNA上的蛋白质进行免疫沉淀,然后通过基因芯片或者其它手段检测目的RNA的含量。19免疫沉淀中抗体的选择20免疫共沉淀技术的应用21单相免疫扩散试验(singleimmunodiffusion)22双向免疫扩散试
5、验(doubleimmunodiffusion)23免疫电泳(immunoelectrophoresis)24对流免疫电泳(counterimmunoelectrophoresis)25火箭免疫电泳(rocketimmunoelectrophoresis)26交叉免疫电泳(crossedimmunoelectrophoresis)27免疫固定电泳(immunofixationelectrophoresis)首先将蛋白质抗原进行电泳分离,电泳后直接将抗体加于蛋白质区带表面,抗体与对应的抗原就会直接结合,形成的复合物嵌于固相支持物中。28免疫印渍技术(immunoblotti
6、ng)29经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应30凝集反应(agglutination)颗粒型抗原与相应抗体结合后,在有适当电解质存在下,抗原与抗体充分反应相互聚集,形成肉眼可见的凝集团块。凝集原(agglutinogen)凝集素(agglutinin)31凝集反应特点1.凝集反应中抗原颗粒较大抗原,长期静置或离心沉淀可自然下沉2.凝集反应中凝集块主要由抗原形成,而在沉淀反应中,沉淀物主要由抗体形成3.凝集反应:需稀释免疫血清中的抗体,使抗体分子不致于过多;沉淀反应:为了不使抗原过多则需稀释抗原32直接凝集反应(directaggl
7、utination)肥达氏反应(Widalreaction):一种试管凝集反应。用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。33血型检测细胞膜表面血清中A型:A抗原抗B抗体B型:B抗原抗A抗体AB型:A和B抗原无抗A和抗B抗体O型:无A和B抗原有抗A和抗B抗体34间接凝集反应(indirectagglutination)35反应类型(1)正向间接凝集反应(forwardindirectagglutination)(2)反向间接凝集反
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