醋酸薄膜电泳.ppt

《醋酸薄膜电泳.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验三血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳（Celluloseacetatemembraneelectrophoresisofserumproteins）1、掌握电泳法分离蛋白质的原理2、熟悉醋酸纤维素薄膜电泳的操作、注意事项3、熟悉测定血清中各种蛋白质相对百分含量的方法4、了解AG的临床意义实验目的分离蛋白质的方法分离方法沉淀法盐析法有机溶剂沉淀法层析法电学法电泳法等电聚焦超速离心法离子交换层析吸附层析凝胶过滤（分子筛）亲和层析电泳依据分子或颗粒所带电荷、形状、大小等不同，因而在电场介质中移动速度不同，从而达到分离的技术

2、。一、电泳H＋OH－H＋OH－pH>pIpH=pIpH

3、动＋＋＋＋＋＋＋＋三、电泳的分类支持介质不同纸电泳（Paperelectrophorisis）醋酸纤维薄膜电泳（CelluloseAcetateelectrophoresis）琼脂凝胶电泳（AgarGelelectrophoresis）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）支持介质装置形式不同：⑴平板式电泳；  ⑵垂直板式电泳；  ⑶垂直柱式电泳pH的连续性不同：连续pH电泳非连续pH电泳血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳Celluloseacetatemembraneelectropho

4、resisofserumproteins本实验以醋酸纤维膜为电泳支持物，分离各种血清蛋白。醋酸纤维膜是由醋酸纤维加工制成的一种细密且薄的微孔膜。广泛应用于医学临床中各种生物分子的分离分析中。实验原理醋酸纤维素较纸电泳的优点电渗作用影响小醋酸纤维素膜对蛋白的吸附小，几乎无“拖尾”。由于醋酸纤维素亲水性小，所容纳的缓冲液也较少，电流大部分是由样品传导，所以分离速度快。醋酸纤维素是纤维素（纸）的醋酸酯血清蛋白质清蛋白和球蛋白清蛋白和α1、α2、β、γ-球蛋白电泳血清蛋白的等电点pI大多在7.5以下，在pH为8.6的巴比妥缓

5、冲液中以负离子形式存在，并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点及形状也有差异，在电场中迁移速率不同，可以在醋酸纤维素薄膜上分离成清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、r球蛋白五个区带。预测电泳谱是什么样？血清蛋白电泳的正常组分醋酸纤维膜电泳蛋白组分变化的临床意义（A/G）可能相关疾病清蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白骨髓瘤↑*肾病综合症↓↑*↑*肾炎↑*↑肝硬化↓↑*急性肝坏死↓*↑↑↑↑传染性肝炎↓↑*↑*急性感染初期↑*↑*↑*慢性炎症/感染后期↑*低球蛋白血症↓*实验步骤一、准备与点样醋酸纤维薄膜电

6、泳装置示意图1、滤纸桥；2、电泳槽；3、醋酸纤维素薄膜；4、电泳槽膜支架；5、电极室中央隔板镊子取出膜条取一条2.5×8cm的膜条充分浸透在巴比妥缓冲液中滤纸吸去多余的缓冲液无光面距一端1.5cm（大拇指宽）处作点样线点样器下端粘上薄层血清垂　直点　样加样时一定要呈直线，垂直分布均匀，这样泳动的区带整齐不歪。放　置膜　条平衡5分钟通电关闭电源点样面向下点样端置于阴极膜条贴紧滤纸，拉直膜条电压：120v/160v时间：10min/50min二、电泳点样线勿与滤纸桥接触通电后，不要用手或镊子接触电泳槽，通电完毕，先切断电

7、源，以防触电。通电完毕浸于染色液（氨基黑10B）中取出膜条三、染色、脱色取出膜条3min依次浸于漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ滤纸吸干薄膜各5min直至漂净白蛋白α1球蛋白β球蛋白α2球蛋白点样线Γ球蛋白取试管6支，编号如下四、定量(两人的膜条共用)试管编号Aα1α2βγ00.4mol/LNaOH6.0ml3.0ml3.0ml3.0ml3.0ml3.0ml蛋白条带清蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白无蛋白区充分振荡、脱净染料比色650nm、定量15min原始数据：清蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白A表1血清各蛋白质吸

8、光值仪器型号：吸收波长：实验时间：实验结果1．计算出各部分蛋白质占总蛋白质的百分数。清蛋白％＝（2A/∑T）×100％α1球蛋白％＝（α1/∑T）×100％α2球蛋白％＝（α2/∑T）×100％β球蛋白％＝（β/∑T）×100％γ球蛋白％＝（γ/∑T）×100％光密度总和T＝2A+α1＋α2＋β＋γ2．计算出清蛋白与球蛋白之比值（A/G）G=α