实验一（5个学时）.ppt

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1、到显微镜室借显微镜，每人一台。医学微生物学实验一新乡医学院微生物学教研室：3029130基础医学院教学办：3029945主讲：邓保国实验成绩安排本实验成绩共30分：考试10分（第五次实验课上测试）。实验报告10分。课堂表现、考勤、值日共10分。实验内容一、实验室生物安全二、无菌接种技术三、细菌形态学观察一、实验室生物安全实验室的危害源生物因素：Biologicalhazard：指有害或有潜在危害的生物因子对人、环境、生态和社会造成的危害或潜在危害。物理因素化学因素后两者的特性：1.可感知，易避免2.危害范围有限3.危害持续时间短实验室生物安全事件2004年4月，中国疾病预防控制中心科研人员，采

2、用未经论证的非典病毒灭活方法，在不符合防护要求的普通实验室内操作非典感染材料，造成北京、安徽发生非典疫情。实验室生物安全事件2010年12月，东北农业大学28名师生因做实验而被感染布鲁氏菌病。动物医学学院院长、党总支书记被免职。实验室生物安全事件2014年6月美国疾病控制和预防中心设在亚特兰大的一间高级别生物安全实验室，在对活炭疽菌进行灭活时，没有遵循正确的程序。随后，他们将可能带有活炭疽菌的样本转移到三个低级别实验室，而后者并不具备处理活炭疽的设施。6月6日至13日，两个实验室可能让芽胞成烟雾状散开。由于相信样本已经灭活，低安全级别实验室的工作人员没有穿上适当的防护设备。最初报告称，75名员

3、工无意中接触到炭疽菌，19日这个数字上升到86人。P4实验室P2实验室P1实验室操作在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害操作能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物操作能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，尚无有效预防或治疗方法P3实验室医学微生物学实验室规则学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要经常清洗消毒。进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律存放指定的储物柜内。严禁在实验室进食、饮水和喧哗打闹。手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要

4、时用消毒液泡手；避免有菌材料溅出；破损器材及时处理并报告。实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的废料要扔在指定容器内；实验完毕清理台面，值日生严格认真打扫卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。二、细菌接种技术实验目的：1.掌握细菌的平板接种方法2.熟悉细菌生长现象的观察方法接种用器材1.接种环和接种针2.生物安全柜接种用器材接种用器材3.灭菌器材4.培养基概念:是人工配制的专供微生物生长繁殖的混合营养物制品。成分：充足的营养物质（水分、碳源、氮源、无机盐）；合适的pH；适宜的温度；适宜的气体环境。接种用器材各种培养基5.恒温培养箱接种用器材细菌的接种技术接种环及其无菌操作方法普通琼脂

5、培养基接种法1.平板分区划线接种法：分离培养细菌，通过此法可以获得纯培养为进一步鉴定细菌提供条件。分区划线（划、转、烧）划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触，以腕力在琼脂表面轻快滑动，不能划破琼脂。第一次划线应占平皿面积的1/10，以后每次划线约占面积的1/4—1/5。划线为连续划线,不能间断，应占满平皿，划线不能交叉重复，每次划完后应灭菌。2.斜面接种法：用于纯菌的移种，可短时间保存菌种。3.半固体穿刺接种法：保存菌种或观察细菌的动力和生化反应4.液体接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基的接种生长现象的观察固体培养基-菌落一个细菌不断分裂而成的细菌群体称之为菌落。观察菌

6、落的形态、大小、表面、边缘、湿度、透明度；在血平板上还要观察溶血情况和色素等。斜面培养基半固体培养基-鞭毛观察细菌的运动液体培养基混浊生长（大多数细菌）沉淀生长（链球菌）膜样生长（专性需氧菌，如结核分枝杆菌、枯草杆菌）操作内容1.练习平板分区划线法，液体，半固体，斜面培养基接种。2.液体、半固体、斜面和平板培养基每人一个。三、细菌的形态学检查一、不染色标本检查(活体）悬滴法压滴法二、染色标本检查单染法：简单染色，一种染料（美兰染色）复染法：复杂染色，两种以上染料（革兰染色、抗酸染色）革兰染色(Gramstain)1884年由丹麦医师Gram创立。革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分

7、为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床上具有非常重要的意义。目的：掌握细菌涂片的制备及革兰染色的方法G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度高，经革兰氏染色后能够将龙胆紫与碘的复合物牢固留在壁内。脂质含量少，不容易被脱色液脱色而呈现紫蓝色。G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度低，含大量脂质，易被脱除染料。原理：革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构比较器材和试剂：1.菌种白色葡萄球菌和大肠杆菌培养物2