耐多菌清真菌杀虫剂的研制.docx

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1、耐多菌清真菌杀虫剂的研制化学农药防治害虫尽管有很多优点,但是大量使用化学农药后引发一系列的安全问题,因此可克服这些问题的防治方法—生物防治得到了更多研究者的关注。生物防治的方法有很多种,但是并不是每一种都适用于害虫防治中,昆虫病原真菌杀虫剂有很多优点,比如,主动感染寄主并且具有致死作用;循环侵染是其他微生物杀虫剂所没有的一个特点;一般情况寄主不会产生抗性;因此国内外都集中研究昆虫病原真菌杀虫剂。莱氏野村菌(Nomuraearileyi,简称Nr,又称为莱氏蛾霉),在世界各地均有分布,是昆虫的重要病原真菌。该菌杀虫毒力强,寄主范围广,能寄

2、生30多种鳞翅目害虫,特别是对鳞翅目夜蛾科类的昆虫有着非常强的致病力,能在多种农业系统中引发流行病,并且针对性非常强,对人体、其他非目标昆虫包括寄生虫还有捕食者无毒害作用。多抗霉素是一种广谱性抗生素类杀菌剂,这种杀菌剂因其内吸传导特性和水溶特性,对作物的抗病效果良好,对环境影响却很小,因此被广泛使用。目前,国内外有关莱氏野村菌对抗生素类杀菌剂的敏感性还没有系统详细的报道,且很少有报道使用耐药性莱氏野村菌进行生物防治害虫。因此研究莱氏野村菌对抗生素的敏感性,并运用各种胁迫方法产生耐药性莱氏野村菌菌株,对于生物防治具有重要意义。本研究通过对

3、10株莱氏野村菌菌株的室内毒力测定,筛选出对斜纹夜蛾具有高毒力的菌株,并对高毒力菌株进行紫外诱变和含多抗霉素平板的胁迫,筛选出耐多抗霉素的莱氏野村菌菌株。为莱氏野村菌和多抗霉素复配制剂研究提供依据。主要研究结果如下:1.本研究通过使用10株供试莱氏野村菌菌株对斜纹夜蛾3龄幼虫致病毒力进行测定,莱氏野村菌侵染后的僵虫先为白色,然后变为深绿色。感染致死初期,幼虫身体发僵、挺直或扭曲,发病后期幼虫出现吐水、下痢等症状。结果表明不同菌株的致病力存在差异,综合比较僵虫率、校正死亡率以及致死中时间(LT50),其中以Nr19菌株的致病力最强,校正死

4、亡率及僵虫率分别为100%和86.6%,致死中时间LT50为5.0501d;Nr16和Nr41紧跟其后,校正死亡率分别为100%和93.2%,僵虫率分别为80.0%和85.7%,致死中时间LT50分别为3.9436d和4.2130d。以Nr16、Nr19、Nr41用于后续试验。2.以筛选到的Nr16、Nr19、Nr41菌株为研究对象,根据对菌株适合致死率75%-85%,确定紫外诱变条件为:在孢子浓度为1x107个/mL时,采用30W紫外灯,照射距离为30cm时,Nr16、Nr19、Nr41照射时间分别为2.5min、4.0min、3.5

5、min。采用菌丝生长抑制率法测定了紫外诱变后的莱氏野村菌对多抗霉素的敏感性。发现不同诱变菌株莱氏野村菌对多抗霉素的敏感性存在一定的差异。诱变菌株Nr4101的EC50值最大,诱变株Nr1601的EC50值最小,分别为1.0540mg/mL和0.4377mg/mL。3.根据多抗霉素在田间的施用浓度是1.67-2.50mg/mL。结合紫外诱变菌株的最小抑菌浓度。在含多抗霉素平板上,通过涂分生孢子法定向筛选莱氏野村菌耐多抗霉素菌株。获得了一株耐药性莱氏野村菌菌株Nr16-I。验证结果表明该菌株Nr16-I在含多抗霉素和不含多抗霉素的平板上均生

6、长。本实验筛选到的莱氏野村菌Nr16-I菌落色泽为乳白色,菌落形态为绒毛状,孢子粉为浅绿色,在SMAY培养基上一般约3-5天就开始产孢。