止泻退热片主要药效学及抗轮状病毒作用实验研究.docx

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1、止泻退热片主要药效学及抗轮状病毒作用实验研究止泻退热片是由解表清里法代表方剂葛根芩连汤中葛根、黄芩、黄连、甘草四味中药提取的有效部位所组成的中药现代复方制剂。研究目的:对止泻退热片的主要药理作用进行评价,对该药物体内外抗轮状病毒感染作用进行评价,并探讨其治疗轮状病毒感染性腹泻的作用机制。研究方法:1在正常小鼠体内和新斯的明所致小肠推进功能亢进的小鼠体内,以小肠推进率为指标考察药物干预后的变化,按照完全随机资料的多组均数间多重比较方法分析止泻退热片对小鼠小肠推进功能的药理作用并且与阳性对照药物葛根芩连微丸、复方地芬诺酯片进行比较。2复制蓖麻油腹泻小鼠模

2、型,以给药后不同时间小鼠腹泻指数为指标考察药物干预后的变化,按照重复测量数据及多组均数间多重比较方法比较给药后不同时间,止泻退热片与阳性对照药物葛根芩连微丸、复方地芬诺酯片的止泻药理作用。3通过最低抑菌浓度方法,以最低抑菌浓度为指标考察药物在体外对金黄色葡萄球菌25933、肠产毒性大肠杆菌44813、志贺氏痢疾杆菌51252、出血性大肠杆菌0157的抑制作用;根据体外抑菌实验结果,选择对药物敏感度较高的两种细菌即分别选择并复制肠产毒性大肠杆菌44813、志贺氏痢疾杆菌51252感染小鼠的模型,考察药物干预对模型小鼠死亡率的影响,采用χ²

3、sup>检验分析比较止泻退热片与阳性对照药物葛根芩连微丸、环丙沙星片的体内抑菌药理作用。4复制啤酒酵母致大鼠发热模型,以给药后不同时间大鼠的体温为指标考察药物干预后的变化,按照重复测量数据分析方法及多组均数间多重比较分析方法比较给药后不同时间止泻退热片与阳性对照药物葛根芩连微丸、安乃近片的解热药理作用。5通过细胞培养手段,采用MTT和细胞病变（CPEcytopathiceffect）结合的方法,以正常细胞存活率为指标考察药物的细胞毒性,以药物对病毒的抑制率为指标考察药物在体外对人轮状病毒A组G3型709株的直接杀伤作用;对人轮状病毒A组G3型709株

4、入侵MA104细胞的预防作用;对人轮状病毒A组G3型709株在MA104细胞中进行生物合成的抑制作用。以治疗指数TI=50%正常细胞存活的药物浓度/抑制50%病毒的药物浓度为指标,评价并比较止泻退热片与阳性对照药利巴韦林注射液的体外抗轮状病毒药理作用的安全性。6建立人轮状病毒A组G3型709株感染4天龄昆明小鼠乳鼠的腹泻模型,观察被病毒攻击后不同时间乳鼠的腹泻率、乳鼠的腹泻程度、乳鼠小肠组织HE染色病理变化、小肠组织超微结构变化;通过酶联免疫吸附方法（ELISA）检测乳鼠粪便（包括大肠内容物）中的轮状病毒抗原;通过免疫荧光方法（IF）检测乳鼠小肠组织

5、中的轮状病毒抗原;通过CPE法及Reed-Munch法检测乳鼠粪便中是否含有感染性轮状病毒及其病毒滴度。7建立人轮状病毒A组G3型709株感染4天龄昆明小鼠乳鼠的腹泻模型,筛选感染病毒阳性的乳鼠进行药物干预,以乳鼠腹泻率、乳鼠腹泻程度、乳鼠粪便中是否含有感染性轮状病毒为指标考察药物对感染轮状病毒乳鼠的治疗作用。采用χ²检验比较并比较给药后不同时间,止泻退热片与阳性对照药物葛根芩连微丸、利巴韦林片对乳鼠腹泻率的影响;按照重复测量数据分析方法及多组均数间多重比较方法分析给药后不同时间,止泻退热片与阳性对照药物葛根芩连微丸、利巴韦林片

6、对乳鼠腹泻程度的影响;采用χ²检验分析并比较在给药第三天后止泻退热片与阳性对照药物葛根芩连微丸、利巴韦林片对乳鼠粪便检测出感染性轮状病毒阳性率的影响。8建立人轮状病毒A组G3型709株感染4天龄昆明小鼠乳鼠的腹泻模型,采用实时荧光定量RT-PCR法检测乳鼠小肠组织钠离子葡萄糖联合转运子（SGLT1）mRNA的表达,采用放射免疫法（RIA）检测乳鼠小肠上皮细胞分泌前列腺素E2（PGE₂）的含量,按照完全随机资料的多组均数间多重比较的方法比较止泻退热片组与模型组、正常组之间上述两种指标的差异,探讨止泻退热片治疗

7、轮状病毒腹泻的作用机制。实验结果:1在考察药物对正常小鼠小肠功能影响的实验中发现:各组小鼠小肠推进率差异有统计学意义,F=6.785,P=0.000;止泻退热片0.78g/kg组小鼠小肠推进率与正常组相比降低,差异有统计学意义P=0.000;止泻退热片0.39g/kg组小鼠小肠推进率与正常组相比降低,差异有统计学意义P=0.002;止泻退热片0.195g/kg组小鼠小肠推进率与正常组相比降低,差异有统计学意义P=0.013;复方地芬诺酯组小鼠小肠推进率与正常组相比降低,差异有统计学意义P=0.000;葛根芩连微丸组小鼠小肠推进率与正常组相比降低,差异

8、有统计学意义P=0.005。止泻退热片0.78g/kg剂量组与葛根芩连微丸组相比小鼠小肠退进率降低,差异没有