接骨木促进骨折愈合有效部位的化学拆分及药理作用研究.docx

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1、接骨木促进骨折愈合有效部位的化学拆分及药理作用研究在已确定接骨木促进骨折愈合有效部位及其主要生物活性的基础上,本实验对接骨木有效部位进行化学拆分,同时从有效部位、有效组分两个化学层次对接骨木进行了较为系统的药理学研究。阐明了接骨木各层次药效物质基础及药理作用。为充分利用接骨木丰富的天然资源提供了重要的依据。1.接骨木促进骨折愈合有效部位的化学拆分及互不交义性研究采用SephadexLH-20凝胶柱色谱对接骨木促进骨折愈合有效部位进行组分拆分。研究各洗脱组分HPLC谱的化学特征,考察拆分组分的不同出峰行为及紫外吸

2、收特征,结合单体化合物的指认。结果表明:水洗脱组分为环烯醚萜类成分;甲醇洗脱组分为木脂素类成分。通过HPLC特征图谱和UPLC-QTOF-MS技术应用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等多元数学统计方法考察组分内化学成分是否交叉,结果表明拆分得到的环烯醚萜组分和木脂素组分互不交叉性良好。采用HPLC法,结合中药色谱指纹图谱相似度评价系统,评定了两类组分的色谱指纹图谱,并对10批样品进行分析测定,结果表明各拆分组分制备工艺稳定可行,并具有良好的可重复性。2.接骨木各层次药效物质基础的

3、药理作用研究采用大鼠股骨骨折模型,通过X光片的观察及血液生化指标的测定考查了接骨木有效部位及其化学拆分组分对骨折愈合不同时期的治疗作用。X光片观察表明:接骨木有效部位和环烯醚萜组分的高、中剂量组可促使骨折大鼠折区的愈合。接骨木有效部位和环烯醚萜组分的高、中剂量组可使骨折大鼠的血清ALP、血清BGP、血清P的含量明显升高,血清Ca含量明显降低。其中以高剂量组作用强度为最佳。采用大鼠股骨骨折模型,在第8周对其血液流变学指标:全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数进行考察。结果表明:血液流变学基本在正常参考值内有所变化,

4、说明手术并没有对实验大鼠造成血栓;与模型组比较接骨木有效部位组和木脂素组有显著性差异,具有活血化瘀的作用。采用了醋酸所致小鼠炎症渗出模型和大鼠足肿胀模型考察接骨木有效部位及环烯醚萜类和木脂素类组分的抗炎作用。小鼠炎症渗出模型中有效部位和木脂素高剂量组相对于模型组表现出显著的抗炎作用且具有剂量依赖性。在大鼠足肿胀模型中有效部位、环烯醚萜、木脂素高剂量组均表现出显著地抗炎作用,但起效的时间点并不一样。可以初步认为木脂素类组分是接骨木抗炎作用的主要有效成分,但可能与环烯醚萜类组分存在相互协同的作用。这与中药的多成分、

5、多途径、多层次、多靶点的特点是相符的。本实验为接骨木抗炎作用机制的研究奠定了理论基础。综上研究结果,木实验完成了对接骨木有效部位的化学拆分并验证了拆分得到的环烯醚萜类组分和木脂素类组分互不交叉性良好。接骨木有效组分对促进骨折愈合、活血化瘀、抗炎方面均有较好的效果,为进一步探究其促进骨折愈合的作用机制奠定了实验基础。