携带bla(NDM-1)基因肠杆菌科细菌的耐药基因及其同源性研究.docx

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1、携带bla_(NDM-1)基因肠杆菌科细菌的耐药基因及其同源性研究目的探讨临床分离的对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药的肠杆菌科细菌的耐药表型、基因型和菌株之间的同源性,为医院感染的控制和预防提供指导。方法收集临床分离的对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药的3株肺炎克雷伯菌和16株雷极普罗威登菌,共19株;采用法国梅里埃Vitek2Compact系统对细菌进行鉴定和药敏;改良Hodge试验和亚胺培南-EDTAE-test条法（金属酶,MBL）初步筛查菌株是否产金属酶;聚合酶链反应检测菌株是否携带产碳青霉烯酶基因、超广谱β

2、-内酰胺酶基因、AmpC酶基因、喹诺酮耐药相关基因和磷霉素耐药基因（fosA3）,并通过测序确定基因型;多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的同源性;质粒接合和Southern杂交试验分析携带bla_NDM-1质粒的特性。结果19株菌Hodge试验和金属酶E条试验均呈阳性,且均携带多个耐药基因,呈现多重耐药。3株肺炎克雷伯菌均携带bla_NDM-1、blaTEM-1、fosA3、oqxA和oqxB基因,而接合子携带bla_NDM-

3、1、blaTEM-1和fosA3基因。16株雷极普罗威登菌中,7株接合成功的原代菌和接合子均携带bla_NDM-1、aac（6′）-Ⅰb和blaTEM-116基因,而另外接合试验不成功的9株仅携带bla_NDM-1、和blaTEM-116基因。脉冲场凝胶电泳显示:3株肺炎克雷伯菌的带型完全一致,属于同一克隆,且MLST分型都是ST22;16株雷极普罗威登菌中,11株菌条带数目和位置完全一致,与另外5株菌的差异只有1²个条带,提示院

4、内存在克隆的流行。质粒接合、分型和Southern杂交试验结果显示肺炎克雷伯菌和雷极普罗威登菌携带bla_NDM-1基因的质粒可以通过接合方式转移到受体菌（E.coliJ53AziR）,两者的质粒大小分别是220000bp和130000bp,且质粒分型都属于IncA/C型。结论经检索,同时携带bla_NDM-1、blaTEM-1、fosA3、oqxA和oqxB基因的ST22型肺炎克雷伯菌和携带bla_NDM-1和blaTEM-116基因的雷极普

5、罗威登菌在国内外均未有报道。因此,应该加强对碳青霉烯类耐药菌的监测,预防和控制产NDM耐药菌的爆发和流行。