T∕CALAS 24-2017 实验动物 螺杆菌PCR检测方法 实施指南.docx

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1、第二十四章T/CALAS24—2017《实验动物螺杆菌PCR检测方法》实施指南第一节工作简况根据中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会的下达的2016年团体标准制（修）订计划，由广东省实验动物监测所和中国食品药品检定研究院共同负责团体标准《实验动物螺杆菌PCR检测方法》起草工作。该项目由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281）技术审查，由中国实验动物学会归口管理。本标准的编制工作是按照《中华人民共和国国家标准GB/T1.12009标准化工作导则》第1部分“标准的结构和编写规则”的要求进行编写的。本标准是在国家科技支撑计划“实验动物质量检测关键技术研

2、究”（项目编号2013BAK11B01）和广东省科技计划项目“广东省实验动物检测技术平台”（项目编号2011B040200010）课题基础上制定而成的，在制定过程中参考了国内外相关文献，对方法的敏感性、特异性、重复性等进行了研究，并对所建立的标准方法进行了应用研究，建立了可行、稳定、特异的螺杆菌普通PCR和实时荧光PCR检测方法。第二节工作过程本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出，广东省实验动物监测所和中国食品药品检定研究院按照团体标准研制要求和编写工作的程序，组成了由双方单位专家和专业技术人员参加的编写小组，制定了编写方案，并就编写工作进行了

3、任务分工。编制小组根据任务分工进行了资料收集和调查研究工作，在国家科技支撑计划“实验动物质量检测关键技术研究”（项目编号2013BAK11B01）和广东省科技计划项目“广东省实验动物检测技术平台”（项目编号2011B040200010）课题研究基础上，组织编写实验动物螺杆菌PCR检测方法技术资料，于2016年4月完成了标准草案的起草工作。标准草案首先征求中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会的意见，2016年10月在南宁召开团体标准征求意见会议，参会专家对标准稿提出了系列修订建议和意见。根据提出的意见编制组对《实验动物螺杆菌PCR检测方法》标准草案进行修改。

4、结合调研、试验验证，形成本标准征求意见稿。2016年11月至12月，标准征求意见稿在中国实验动物学会网站公开征求意见，共收集意见或建议12个，编制组根据专家提出的修改意见和建议，采纳10个，未采纳2个。繡譏列觀经对《实验动物螺杆菌PCR检测方法》团体标准整理修改后形成标准送审稿、标准送审稿稿编制说明和征求意见汇总处理表。2017年2月21日，全国实验动物标准化技术委员会在北京召开了标准送审稿专家审查会。会议由全国实验动物标准化技术委员会的委员组成审查组，认真讨论了标准送审稿及其编制说明、意见汇总处理表，提出了修改意见和建议。与会专家认为本标准填补了螺杆菌检测方

5、法国内无标准的空白，一致同意通过审査。会后，编制组根据与会专家提出的修改意见，经对《实验动物螺杆菌PCR检测方法》团体标准修改完善后形成标准报批稿、标准报批稿编制说明和征求意见处理汇总表。2017年5月，本标准经中国实验动物学会第六届理事会常务理事会第八次会议审议通过，批准发布，于2017年5月19日起正式实施。第三节编写背景啮齿动物螺杆菌属于螺杆菌属，是一群革兰氏染色阴性、微需氧条件生长且营养要求较高的螺旋状细菌。该菌的自然宿主是鼠，具有较高感染率并主要以隐形感染形式存在于啮齿类实验动物的消化道中。免疫缺陷动物感染螺杆菌可引起严重的临床症状，严重影响实验动物

6、质量及试验结果。啮齿动物螺杆菌包括胆汁螺杆菌(H.bilis肝螺杆菌(H.hepaticus、、小家鼠螺杆菌(Hmuridarum啮齿类动物螺杆菌(77.rodentium)和盲肠螺杆菌(H.typhlonius)等，螺杆菌是国外实验动物健康监测的一个必检项目，国际实验动物理事会等已将螺杆菌列为实验动物必须排除的病原菌，我国实验动物国家标准中虽然尚未把螺杆菌列人检测项目，但是一些实验动物生产或使用单位，以及一些CRO公司都把螺杆菌列为筛査项目。在螺杆菌检测方法研究方面，分离培养法因其可靠直接而成为螺杆菌诊断检测的首选方法，但因螺杆菌的生长条件苛刻，而阻碍了

7、该检测方法的应用。随着分子生物学技术的发展，PCR检测技术因高效、快速简便等优点而被广泛应用于检测螺杆菌。实时荧光PCR(real-timefluorescencePCR)技术是在PCR扩增反应过程中加人荧光基团，利用荧光信号累积实时检测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。它具有定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点。该技术自发明以来，被广泛地应用于DNA或RNA绝对定量分析、基因表达差异分析和肿瘤基因检测等多个学科领域。本研究参照文献报道建立了多种螺杆菌PCR检测方法，具有良好的特异性且敏感性良好。

8、为了使这一先进的病原检测技术能更好地为