SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤讲解学习.doc

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1、精品好文档，推荐学习交流【跑电泳的步骤】1、取出电泳仪器和四个烧杯；2、将超纯水倒入烧杯中，保鲜膜封口；3、配制过硫酸铵溶液（AP）：0.1gAP+0.9g超纯水，保鲜膜封口；4、取出所有药品。Tris-HCL(88,6.8)，TEMED，SDS，Acry-bis，按次序排好；5、拿卷纸平铺，移液枪枪头：三个蓝，两个黄，一个白，移液枪3只；6、先配分离胶7、组装凝胶模具，插好板（1）海绵用自来水润湿，插在下面槽里；（2）板：Bio-Rad前后玻璃板，注意前后顺序，夹子夹好，塞枪头于夹子上。8、配胶见配方，用2号蓝混匀所有试剂；

2、9、加液至支架上方，用超纯水液封（不能用气泡）；10、待界面清晰后，用滤纸将水吸干；11、配浓缩胶；12、插梳子：一个个斜着插，有字面朝向我；13、拔下梳子，转移（有字朝里，白色架子垫黄纸，将玻璃板卡在绿卡下面，不要有空隙，装去离子水，不能漏（1h），等待。），样品煮沸3分钟；14、用10uL移液枪移液，移液，每个依次加入梳槽内；15、电压（浓缩胶）90V，电流20mV；16、盖上盖子：红对红，黑对黑；插上电源插头：红对红，黑对黑。【附配方】分离胶separatinggel(5mL)(1个板3.5mL)1板2板Prescrip

3、tion12%10%7.5%3.5mL7.0mLDelH2O1.6mL1.9mL2.3mL1.33mL2.66mL1.5MTris-HCLpH8.81.3mL1.3mL1.3mL0.91mL1.82mL30%Acry/bis单体胶（29.2g+0.8g/100mL）2mL1.7mL1.3mL1.19mL1.38mL10%SDS50uL50uL50uL35uL70uL10%AP50uL50uL50uL35uL70uLTEMED2uL2uL(5uL)2uL3.5uL7uL(夏)~8uL浓缩胶Stackinggel(2板3mL)Pr

4、escriptionVolume(2mL)(2mL)DelH2O1.4mL2.1mL0.5MTris-HCLpH6.8250uL375uL30%单体胶330uL495uL10%SDS20uL30uL10%AP20uL30uLTEMED2uL(5uL)3uL(8uL冬，5uL夏)【附所需试剂配制】仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3精品好文档，推荐学习交流1、30%单体胶（30%单体胶即30%T，2.67%C）配制50mL：丙烯酰胺Acry：14.6g，甲叉双丙烯酰胺bis：0.4g；(100mL：Acry29.2g，b

5、is0.8g)超纯水定容至50mL，0.45uM膜过滤，4℃保存（一个月）；说明：单体浓度%T是指单体总质量（丙烯酰胺+双丙烯酰胺）在溶液中的百分比（m/V），可选择的范围为3%~30%；%C是指双丙烯酰胺与单体总质量的比值（m/m），也指交联度。2、分离胶缓冲液pH8.8配制100mL(1.5MTris-HCLpH8.8)：Tris18.15g，部分去离子水溶解，并用HCL调pH8.8，最后定容至100mL，过0.45uM膜，4℃保存。3、浓缩胶缓冲液pH6.8配制50mL(0.5MTris-HCLpH6.8)：Tris3.

6、0g，部分去离子水溶解，并用HCL调pH6.8，最后定容至50mL，4℃保存。4、10%SDS：5g/50mLH2O，配制后4℃保存。5、10%AP（过硫酸铵）：用时现配，溶解状态十分不稳定，0.1g/1mLH2O。.6、电泳缓冲液：配1000mLTris3.0g，甘氨酸14.4g，SDS1.0g，去离子水定容至1000mL。7、染色液：（1）原液：配制200mL：考马斯亮蓝（R-250）：2.0g+200mL去离子水；（2）染色液：配制500mL：原液62.5mL，甲醇250mL，冰乙酸50mL，去离子水137.5mL。8、

7、脱色液：1000mL甲醇500mL，冰乙酸100mL，去离子水定容至1000mL。9、TEMED原液稳压：Stacking：90V（20mA），Seperate：120V（25mA）。第二章：数列基础过关题（2）一、选择题1．{an}是首项a1＝1，公差为d＝3的等差数列，如果an＝2005，则序号n等于()．A．667B．668C．669D．6702．在各项都为正数的等比数列{an}中，首项a1＝3，前三项和为21，则a3＋a4＋a5＝()．A．33B．72C．84D．1893．等差数列项的和等于（）A．B．C．D．4．与，

8、两数的等比中项是　　　　　　　　　　　　　　　　　（）A．　　　　　B．　　　　　C．　　　　　D．5．等比数列{an}中，a2＝9，a5＝243，则{an}的前4项和为　　　　　　　　　().A．81B．120C．168D．1926．已知等差数列{an}的公差为2，若a1，