葡萄皮中多酚类化合物提取工艺优化

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1、葡萄皮中多酚类化合物提取工艺优化　　摘要：采用热浸提法从葡萄（Vitisvinifera）皮中提取多酚类化合物，通过单因素试验和正交试验考察提取溶剂、浸提温度、浸提时间和料液比等因素对多酚提取量的影响，优化提取条件。结果表明，优化的葡萄皮中多酚类化合物的提取条件为体积分数100%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液（体积比1∶1∶1）作提取溶剂、料液比m葡萄皮∶V提取溶剂=1∶14（g/mL）、浸提温度60℃、浸提时间40min，所得葡萄皮中多酚类化合物的提取量为16.866mg/g。关键词：葡萄（Vitisvinifera

2、）皮；多酚类化合物；热浸提法；优化中图分类号：S663.1；R284.2文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）15-3622-03多酚类化合物是葡萄中的主要活性物质之一，大部分存在于葡萄皮和子中[1]。研究显示因酿酒方式及葡萄品种不同每千克葡萄皮中多酚类化合物含量可达285～550mg[2]，目前葡萄子中多酚的提取和应用已有大量的研究，而葡萄皮作为一种重要的多酚资源，其相关研究报道相对较少。本研究以酿酒后分离的葡萄皮为原料，采用混合溶剂提取其中的多酚类化合物，并对提取条件进行了优化。1材料与方法81

3、.1主要材料、试剂与仪器葡萄皮：酿酒后分离出的葡萄皮，在70℃恒温干燥后用粉碎机将其粉碎备用。焦性没食子酸标准样品、甲醇、乙醇、丙酮、盐酸、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾均为分析纯，购自天津市大茂化学试剂厂。主要仪器包括722N型可见分光光度计（上海绿宇生物科技有限公司），YXQ-LS-30S11型高速粉碎机（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），HH-S24型真空干燥箱（深圳市三利化学有限公司），JY2502型电子天平、DK-S24型电热恒温水浴锅（上海精密科学仪器有限公司）、BCD-231型冰箱（伊莱

4、克斯），80-2型高速离心机（金坛大地自动化仪器厂）。1.2试验方法1.2.1标准曲线的绘制准确称取0.5g焦性没食子酸标准样品，加蒸馏水溶解并移入100mL容量瓶中定容，在6支100mL容量瓶中分别加入5.0g/L没食子酸标准样品溶液0、1、2、3、5、10mL，加入蒸馏水定容至100mL，在波长540nm处测吸光度A，以吸光度为纵坐标（y）、没食子酸质量浓度（x//g/L）为横坐标绘制标准曲线（图1），得到没食子酸质量浓度对吸光度的回归方程为y=0.6980x-0.0035，复相关系数r2=0.9966，表明线

5、性关系良好。1.2.2热浸提法提取葡萄皮中的多酚类化合物称取1g葡萄皮粉，加入20mL提取溶剂，60℃水浴浸提18h后趁热离心，取上清液，定容至25mL，吸取1mL测定多酚类化合物的含量，平行测定3次。1.2.3单因素试验设置单因素试验分别考察提取溶剂、提取溶剂浓度、浸提时间、浸提温度和料液比（m葡萄皮∶V提取溶剂，g/mL，下同）对多酚提取量的影响。①提取溶剂。精确称取1g葡萄皮粉6份，分别加入20mL蒸馏水、乙醇、甲醇、甲醇—乙醇—丙酮混合溶液（体积比1∶1∶1）、甲醇—水—盐酸混合溶液（体积比80.0∶19.

6、9∶0.1）、乙酸乙酯，60℃水浴浸提1h后趁热离心，取上清液用体积分数80%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液定容至25mL，吸取1mL测定多酚类化合物的含量，计算多酚提取量。②提取溶剂浓度。精确称取1g葡萄皮粉6份，加入10mL体积分数分别为0%、20%、40%、60%、80%、100%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液，60℃水浴浸提1h，离心后取上清液定容至25mL，吸取1mL测定多酚类化合物的含量，计算多酚提取量。③浸提时间。精确称取1g葡萄皮粉6份，加入10mL体积分数80%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液，60℃水浴中分别

7、浸提10、20、30、40、50、60min，趁热离心，取上清液定容至25mL，吸取1mL测定多酚类化合物的含量，计算多酚提取量。④浸提温度。精确称取1g葡萄皮粉7份，加入10mL体积分数80%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液，分别在30、40、50、60、70、80、90℃水浴中浸提308min，趁热离心，取上清液定容至25mL，吸取1mL测定多酚类化合物的含量，计算多酚提取量。⑤料液比。精确称取1g葡萄皮粉6份，分别按1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14的料液比加入体积分数80%的甲醇—乙醇—丙酮混合

8、溶液，60℃水浴浸提30min，趁热离心，取上清液定容至25mL，吸取1mL测定多酚类化合物的含量，计算多酚提取量。1.2.4正交试验设置四因素三水平正交试验，考察甲醇—乙醇—丙酮混合溶液的体积分数、浸提温度、浸提时间、料液比对多酚提取量的影响[5]，正交试验因素与水平见表1。1.2.5多酚类化合物含量的测定采用酒石酸亚铁法测定提取液中多酚类化合物的含量[3