最新MCAO模型的制备.doc

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1、__________________________________________________实验前准备实验器材：干棉球、酒精棉球、75%酒精、生理盐水、注射器（1ml、2ml）、黑色记号笔、固定大鼠用粗线绳、大鼠板、染色小烧杯、标本瓶手术器械：备皮剪子1、眼科剪1、大直镊1只、小弯镊1对、（动脉夹2）、止血钳2-3、缝合线、缝合针、持针器麻醉剂：10%水合氯醛（400mg/kg）保温：60W白炽灯，于37cm高处直接照射能使肛温保持在37℃栓线：直径0.24mm，头端光滑圆钝；在栓线18mm的位置用黑色记号笔标记；75%酒精清洁后置1:2500单位肝素化生理盐水中备用。体重与栓线直径：

2、直径0.24mm的栓线适用于体重220-280g的SD大鼠。TTC的配制：用0.2mol/L磷酸缓冲液（PBS）配成2%TTC溶液（pH7.4），避光保存。药物配制：无论生理盐水还是受试药物标签均采用代号，给药及评分均采用单盲。仪器激光多普勒血流仪（LaserDopplerFlowmetry,LDF）系统，包括：PeriFlux5001MainUnit，PF5010LDPMUnit（激光多普勒微血流灌注量检测单元），LDProbe407-1（PerimedCo.,Jarfalla,Sweden）；大鼠脑立体定位仪（深圳市瑞沃德生命科技有限公司）；牙科手钻（Strong90#,Korea）；大鼠

3、脑切片模具；荧光正置显微镜(NIKONECLIPSE80i,×400)及成像系统（ACT-2UNIKONImagingSystem）。大脑中动脉栓塞（MCAO）模型的制备参照ZeaLonga等[2]建立的大鼠大脑中动脉内栓线阻断方法，作适当改进。10%水合氯醛溶液400mg/kg，腹腔注射麻醉动物。大鼠仰卧位固定，颈部正中切开皮肤，钝性分离各层组织，暴露右侧颈总动脉(CCA)。分离至颈内动脉（internalcarotidartery，ICA）、颈外动脉（externalcarotidartery，ECA）分叉后一段，仔细分离避免损伤迷走神经和气管，置线备用。收集于网络，如有侵权请联系管理员删

4、除__________________________________________________于颈内、颈总动脉处用动脉夹夹闭，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将尼龙线由颈外动脉插入，插入后用0号丝线结扎，以防止出血，打开颈内动脉处动脉夹，将尼龙线插入颈内动脉，继续插入至颅内，插入深度约18.5±0.5mm至微感阻力，使尼龙线头端通过MCA起始处，到达较细的大脑前动脉，此时即实现右侧大脑中动脉的血流阻塞，结扎ICA以固定尼龙线和防止出血，逐层缝合，尼龙线残端留lcm长于皮外。假手术组只进行术前麻醉和血管分离术，不结扎及导入线栓。手术过程中室

5、温保持在24-25℃，生物机能实验系统进行动物呼吸及心电监测。3．局部脑血流量测定大鼠俯卧位固定于立体定位仪上，开颅窗并清理手术视野，以前囟为坐标原点，选取前囟后1-2mm、右侧2-4mm为测定点[9]，周围直径约2-3mm区域用牙科钻打薄，保持硬脑膜的完整并避开较大的血管，定位并固定好探头座。将动物从定位仪取下并使其仰卧位于手术台上，进行MCAO手术，当线插入ICA后先不插入颅内，稳定LDF读数后，记录5min内血流值，以其平均值作为脑血流的基础值（baselinevalue）。把线插入颅内，当血流值突然下降至基础值的10%-20%时，提示中脑动脉血流已被阻断。每组MCAO前的血流值为本组的

6、基础值（100％），手术后血流值均以此基础值的百分率表示。收集于网络，如有侵权请联系管理员删除__________________________________________________4．神经行为学检查Bederson’s评分动物于给药前及处死前进行神经行为学观察，参照ZeaLonga的方法，提鼠尾离开地面约1尺，观察两前肢状况；将大鼠置于水平地面，推动其双肩，观察两侧抵抗力有无差异；大鼠置于地面，观察其行走情况。采用四级评分法（0-5分），分数越高，说明其神经行为损伤越严重。（1）行为完全正常者，记0分；（2）提起鼠尾离开地面，手术对侧前肢内旋、内收者，记1分；（3）大鼠至地面，用

7、手挤压两侧检查其抗力，手术对侧抗力下降者，记2分；（4）大鼠至地面，观察其行走，围绕手术对侧转圈者，记3分；（5）损伤极其严重，已无法自主活动者，记4分。5．脑梗死体积的测定：评分后大鼠断头处死，迅速将取出的脑组织置于-20℃冰箱，10min后置室温环境，将脑置于大鼠脑切片模具中，切除嗅球、小脑和低位脑干后按图谱所示间隔2mm冠状切五刀，切成6个大脑连续冠状粗切片。然后迅速将脑片置于5ml含2%T