眼针疗法干预mcao模型大鼠抗氧化机制探究

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1、眼针疗法干预MCAO模型大鼠抗氧化机制探究　　随着人口老龄化的加重，中风病发病率也随之提高，严重威胁着人类健康，探索中风病发病机制及有效防治方法成为医疗工作者的首要任务。眼针是以祖国医学脏腑经络理论为基础，根据眼球结膜上血管的形色变化，判断性质和部位，然后辨证针刺眼周特定穴位以治疗全身疾病。根据后天八卦将眼周分为八个区，再与五脏六腑联系起来，治疗急性缺血性中风时选取肝区、肾区、上焦区、下焦区以滋肾阴，清肝火，输通上下焦气机，活血通络，使病得愈。眼针对于缺血性中风的疗效已为众人所承认，但其作用机制尚不清楚，本研究拟采用动物实验的方式，探索眼针对缺血性脑病的抗

2、氧化作用机制。1实验材料1.1实验动物SPF级SD大鼠60只，购自中国医科大学，许可证号：SCXK（辽）2008-0005。大鼠购入后适应性饲养1w，1w后用于正式试验。大鼠饲养于通风干燥的环境中，室温（18±2）℃，相对湿度45%。常规颗粒饲料喂养，自由饮水，12h昼夜节律，更换1次/d垫料，以保证大鼠生存环境洁净。4大鼠体重均匀，均在（300±30）g范围，毛色纯白，富有光泽，活动度适中，晚间活动度增加，步态正常，行为学观察未见异常大鼠。1.2仪器设备恒温水浴振荡器，SHA-B型，常州国华仪器设备厂生产。电子天平，JY5002型，0.01g～500g，

3、上海精密科学仪器有限公司生产。电子天平，BS223S型，0.001g～220g，北京赛多利斯仪器系统有统公司生产。微量移液器，美国热电公司生产。紫外分光光度计，T6新世纪型，北京普析通用仪器设备有限公司生产。1.3实验试剂及耗材MDA、SOD和GSH-PX测试盒购自南京建成生物研究所。针灸针购自成大方圆连锁药店（陵东分店）。冻存管、吸头、PCR管等耗材均购自沈阳博尔美生物有限公司。2实验方法2.1实验动物模型的复制2.1.1脑缺血再灌注大鼠模型的复制参考马贤德[1]等人发表的”线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究”一文复制脑缺血再灌注大鼠模型。模型复制

4、成功后，栓塞2h后，拔除栓塞线，进行再灌注，再灌注时间为72h。2.1.2假手术组动物模型复制假手术组手术方式同模型组，但不做栓塞，仅暴露出右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA），然后逐层缝合即可。2.2模型评价4神经功能缺损评分：参考Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉完全清醒后进行评分[2]。0分：没有神经损伤；1分：对侧前爪不能自由伸展；2分：向对侧旋转；3分：向对侧翻到；4分：行走不自由，意识模糊。分值越高，说明动物所表现出的问题就越多。选取评分在1～3分的动物模型进行试验。2.3实验分组及干预因素施加2.3.1

5、实验分组SPF级SD大白鼠60只，随机分为四组：空白对照组（10只），假手术组（10只），MCAO模型对照组（20只），眼针治疗组（20只）。2.3.2各组干预因素施加空白对照组，常规饲养，不施加任何干预。假手术组，采用2.1.2中所述方法，复制假手术模型，模型复制后正常饲养，不做任何处理，模型复制后72h进行相关指标检测。MCAO模型对照组，采用2.1.1中所述方法，复制脑缺血再灌注模型，模型复制后，正常饲养，不做任何处理，于再灌注72h进行相关指标检测。眼针治疗组，采用2.1.1中所述方法，进行MCAO模型复制，再灌注即刻开始进行针刺治疗，2次/d，连

6、续3d。于再灌注72h进行相关指标检测。2.3.3眼针取穴及刺法4取13mm毫针，眼针组选定大鼠眶周2mm处进行针刺，选择的位置比对人体取穴措施[3，4]，选取肝区、上焦区、下焦区、肾区，见图1。采用针刺的手段：从眼眶边缘2mm部位进行平刺，左眼从顺时针方向（右侧按逆时针方向），从该穴区起始定位线向终止定位线进针，进行平刺操作，刺入真皮，达到皮下组织，进针3mm，到终止定位线为止。留针20min，留针10min时用刮柄进行刮针1次，刮针5下。图1眼针定位示意图2.4指标检测2.4.1死亡率和神经功能缺损评分观测各组大鼠模型复制成功后，进行再灌注前参考”神经

7、功能缺损评分”标准进行行为学评分，以评价模型复制成功情况。末次针灸后，清点各组大鼠数量，计算总死亡率，并对各组大鼠再次进行神经功能缺损评分，统计分析组间差异。2.4.2各组大鼠血清中MDA、SOD和GSH-PX含量测定各组大鼠末次针灸后，以10%水合氯醛（3.5ml/kg体重）腹腔麻醉，剖开腹部，经腹主动脉采血，静置1h后，2000转/min，离心10min，分离血清备用。采用比色法对各组大鼠血清中MDA、SOD、GSH-PX的含量进行测定。2.5统计方法采用SPSS11.5统计软件分析，实验数据均采用”x±s“表示，组间比较采用单因素方差分析，P　　3.

8、2各组大鼠血清MDA、SOD和GSH-PX含量各组大鼠血清中MDA