高通量测序原理复习过程.ppt

《高通量测序原理复习过程.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、高通量测序原理Solexa的基本原理扩增“桥”结构单链引物DNA簇单分子克隆~1000DNA片段per~1µm“DNA簇”~1000“DNA簇”per100µmsquare~40millionclustersperexperiment准备DNA片段两端接上adapters将DNA片段通过adapter锚定在芯片上循环扩增DNA片段成“DNA簇”20micronsSequence检测可逆终止反应ReversibleTerminatorChemistryOPPPHNNOO荧光基团3’保护基团Nextcycle掺入检测去保护基团去荧光基团ODNA

2、HNNOO3’O5’游离3‘末端XOH4种标记过的核苷酸Sequencing-by-Synthesis(SBS)5’GTCAGTCAGTCAGT3’5’CAGTCATCACCTAGCGTA掺入一个碱基Cycle1:加入反应体系移除其他未掺入的核苷酸信号检测Cycle2-n:加入反应体系，循环cycle11、每轮测序反应加入四种带有荧光标记的dNTP，末端带有可以被去除的保护基团2、每轮反应只能整合一个核苷酸，仪器读取相应的荧光信号3、信号读取结束，用化学方法去除阻断基团和荧光基团，进行下一轮测序反应123789456TTTTTTTGT…TGCT

3、ACGAT…根据每个DNA簇每轮反应读取的荧光信号序列，转换成相应的DNA序列通过荧光信号分析核苷酸序列优缺点高度自动化的系统读取片段多，适合进行大量小片段的测序，如microRNAprofiling基于可逆反应，随反应轮数增加，效率降低，信号衰减，读取序列较短，给从头测序（denovosequencing）拼接带来困难技术特色突出表现每张测序芯片有8个通道，每个通道可单独运行一个样品，也可以把多个样品混合在一起检测；一次实验可读取大于15亿个碱基/芯片；无需建库，自动化样品制备，简单；实验费用低，测序成本为传统测序方法的1/100；样本使用效

4、率极高，所以对少量样本也可以极灵敏精确地检测。应用测序与重测序表达谱分析SmallRNA鉴定与定量SNP检测DNA甲基化分析此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢