高效液相检测器教学教材.ppt

《高效液相检测器教学教材.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、高效液相检测器检测器是高效液相色谱仪的三大关键部件之一。按其适用范围检测器可分为通用型和专属型两大类。专属型检测器只能检测某些组分的某一性质，紫外检测器和荧光检测器属于这一类，它们只对有紫外吸收或荧光发射的组分有响应；通用型检测器检测的是一般物质均具有的性质，示差折光和蒸发光散射检测器属于这一类。理想的HPLC检测器高灵敏度；可忽略的基线噪音线性范围宽独立于流动相及操作参数的响应对压力、温度及流速等变化不敏感长时间操作的稳定性死体积小非破坏性选择液相色谱的检测器要考虑的因素：你要分离的化合物/样品的化学特性化学结构、分子量及紫外光谱等等

2、流动相的影响（溶剂、缓冲盐改性剂等）梯度还是等度灵敏度需求是否有双检测的需求表1.液相色谱常用检测器的一般性质检测器选择性梯度洗脱线性范围最低检测限(g/ml)敏感性对流速对温度紫外紫外吸收可以1052×10－10不敏感低示差通用型不可以1042×10－7不敏感10－4荧光荧光物质可以10310－11不敏感低电化学电活性不可以10610－12敏感1.5%电导离子不可以2×10410－8敏感2%一、紫外检测器(ultravioletdetector;UVD)紫外检测器是一种应用最广HPLC检测器,当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可

3、见检测器。紫外检测器的工作原理是朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律。优点：应用最广，对大部分有机化合物有响应；灵敏度高（检测下限为10-10g／ml）；线性范围宽；它的最重要特征是对流动相的流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。由于灵敏高，因此即使是那些光吸收小、消光系数低的物质也可用UV检测器进行微量分析。缺点：但它只能检测有紫外吸收的物质，而且流动相有一定限制，即流动相的截止波长应小于检测波长。如果溶剂中含有吸光杂质，则会提高背景噪音，降低灵敏度。此外，梯度洗脱时或测定波长较短时，基线还会产生漂移。例1：紫外检测器检测大黄素

4、和大黄酚光电二极管阵列光谱检测器是紫外检测器的重大进展。采用这种检测器可以瞬间实时对流出液进行全光谱检测,使提供的信息量大幅度增加。换句话说,在一次色谱操作中,可同时获得吸光值、流出时间和各组分的紫外-可见光谱图在一起的三维谱图,提供既定量又定性的色谱信号。吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量。光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector;PDAD)光电二极管阵列检测器使用二极管阵列检测器，可以对色谱峰进行光谱扫描，峰纯度鉴定的定性分析，在方法研究中可以快速选择最佳检测波长，在多组分混合物分析中可以编辑波长

5、程序。采用二极管阵列检测器进行论证，也是目前常采用的一个强有力的手段。它通过对一个色谱峰的数点进行紫外扫描，然后比较所得到的扫描图谱的接近程度从而评价被检测峰的纯度。利用二极管阵列检测器进行峰纯度检查的缺点：（1）杂质浓度低，或与主成分相比吸收太小，达不到检测灵敏度，无法检测出来。（2）当杂质的发色团与主成分一致，或者说杂质与主组分有相同或几乎相同的光谱图且具相近的流出时间，此时杂质也无法发现。例：二极管阵列检测器在农药液相色谱分析中的应用液相色谱技术是农药分析的重要手段，二极管阵列检测器作为液相色谱的检测器也开始用于农药原药、制剂的分

6、析中。液相色谱法分析农药样品，绝大多数采用紫外检测器，对特定组分往往使用固定波长来检测。这些方法中，色谱峰的保留时间是对组分定性的唯一依据。但是在分析复杂样品的时候，仅依靠保留时间定性往往是非常困难的。在对样品有一定了解的情况下，使用二极管阵列检测器，可以很方便地解决这一问题。摘自王　骏,胡　梅,祝建华.二极管阵列检测器在农药液相色谱分析中的应用[J].农药,2006,45(7):466,469.二、荧光检测器（fluorescencedetector;FD）荧光检测器是一种高灵敏的,选择性检测器,其灵敏度比UV高10-1000倍。它适

7、用于检测物质本身具有荧光或为了提高灵敏度将无荧光的物质衍生成荧光衍生物。原理：有机共轭芳环分子受紫外光激发后发出荧光。优点：其灵敏度很高，痕量分析和梯度洗脱样品的检测均可采用。可用荧光检测的物质：如某些代谢物、食品、药物、氨基酸、多肽、生物碱和甾族化合物等。由于荧光检测器的高灵敏度和选择性，它是体内药物分析常用的检测器之一。缺点：基线稳定需平衡时间较长。例：高效液相色谱荧光检测法测定血浆中阿霉素的浓度本实验中曾采用紫外检测器测定血浆中阿霉素的含量，波长233nm，但由于杂质峰的干扰较多，改用荧光检测器测定。阿霉素为蒽醌类结构，内标α-萘

8、酚为芳族化合物,均能发生荧光。大多以荧光法检测阿霉素含量的文献均选择激发波长在480nm附近,发射波长在560nm附近,以寻求最大响应值为主要参考值,同时兼顾α-萘酚的峰高响应值,筛选了多对激发/发射波长,