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1、犷柠檬酸产生菌的选育上海新型发酵厂徐定邦李文通,。。柠檬酸发酵已有几十年历史文献浩翰本文仅对菌种选育方法和成果作一介绍一产柠檬酸菌种的分布。关于产柠檬酸菌种的分布具有工业生产价值的菌株比较集中于黑曲霉和假丝酵母‘,。‘,,字佐美检测过一千多株黑曲霉其中一半以上菌株能产卜以上的柠檬酸阿部等,。‘,检测了一千多株从花蜜分离的酵母其中一百多株能产。一的柠檬酸和‘’,。各检测了几十株假丝酵每都能累积柠檬酸王分析了已鉴定的个属,,的株酵母发现凡以芽殖方式繁殖的酵母容易累积柠檬酸而以其它方式繁殖的酵。,母不累积柠檬酸上述统计对于确定筛选方向很有帮助但是为什么
2、有些种属的菌株容,,,易累积柠檬酸而另一些种属菌株不累积柠檬酸至今所知甚少是一个尚待研究的问。题二诱变育种,,虽然从自然界筛选柠檬酸产生菌比较容易但产酸水平不高往往经过诱变才得到。、、高产菌株已应用于柠檬酸育种的物理和化学诱变方法有紫外线射线一射、、、、、、、、线超声波乙烯亚胺秋水仙素硫酸二乙醋亚硝酸甲纂磺酸乙酿氮氢亚硝。基腿等、、。比较了用紫外线一丫射线氮氛和秋水仙素的效果对每一种诱变因子,、、分析了五百个菌落正变株产酸比亲株高以上比例分别为,,。和但以用一,射线得到高产株产酸比亲株高以上比例最高占”认为用亚硝基肌处理一小时存活率小于时得到稳定
3、高产。,,株的比例较高认为用一,射线处理存活率的左右时得到高产株比。例较高,,要得到高产菌株往往要经过多步诱变用氮氛诱变使产酸从增加到,,。又用一,射线诱变使产酸增加到再用紫外线诱变使产酸提高到。,,而使用一,射线经三次诱变使产柠檬酸转化率从逐步提高。。‘,到还从一株转化率只有左右的黑曲霉用紫外线和,射线诱变得到二,,。株突变株以蔗糖为碳源时产酸转化率达供糖的和三初筛方法,。,为了减少摇瓶工作量可以在琼脂平板中加人碳酸钙根据透明圈大小进行。,、,初筛也可以在琼脂平板中加入指示剂如嗅酚艺澳甲酚绿根据显色圈大小进。,。,行初筛但是黑曲霉在琼脂平板上的
4、蔓延生长影响了这种方法的使用效果二©1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net,。,发明的纸片培养方法克服了这一缺点将滤纸浸渍含指示剂的培养基置于平皿,,,,内将稀释的抱子悬浮液接种于纸片上长出的单菌落相当紧密变色圈界限明显变。,”色圈直径与菌落直径之比的大小与发酵时的产酸高低相当一致用这种方法从,,。万个菌落中初筛株进行摇瓶试验从中得到产酸比每株提高一倍的突变株‘”,,,复旦大学遗传研究所等改进了接种方法
5、提高了效率较快选得了比原生产菌提高。,的突变株由于培养基中生理酸性盐被利用后形成的无机酸及菌株分泌的其它有机酸,。‘均会使指示剂显色故指示剂显色法专一性很差以对二甲基氨基苯,,,。醛的醋醉溶液喷洒并于℃加热仅柠檬酸显明显的紫色检限为微克为了得,。到所需的菌种需在测试前先将菌落复制四菌落形态特征和产酸关系。关于黑曲霉菌落形态和柠檬酸产量之间的关系已累积了不少资料报导抱,。子颜色发生变化的一百多株突变株中一半以上是正变株发现小菌落变异。株的产酸可比亲株提高倍受到很多人注意的是分生抱子形成的疏密和柠檬酸累。〔‘,,积能力的关系观察到高产柠檬酸变异株往往
6、在麦芽汁斜面上培养一星期,,。,‘,日,以上时才形成稀疏的分生抱子而产酸低的亲株仅三天就形成浓密的分生抱子指出在用发酵培养基配制的斜面上尤其容易显示出分生抱子形成能力和累积柠檬酸能力。、之间的相应关系梁化成在描述他们的高产柠檬酸的菌株时都提到分生抱。。子稀疏这一特征黑曲霉形成分生抱子时需要活跃的完整的三叛酸循环分生抱子稀,。,疏可能正是由于细胞内三叛酸循环微弱所致而三叛酸循环微弱特别是乌头酸水合。酶和异柠檬脱氢酶失活是有利于柠檬酸累积的所以分生抱子稀疏和柠檬酸累积增加可,。能有一定内在联系值得加以应用和深入研究五曹养缺陷型突变株和产酸。、、甲硫氨
7、扩用亚硝基肌诱变用过滤富集法获得了需组氨酸胧氨酸酸为生长。,。因子的营养缺陷型其产酸大多低于原养型亲株个别与亲株相近“用、、、甲基磺酸乙醋诱变得到了需尼克酸对氨基苯甲酸腺嘿吟胞喀咙和各种氨基酸为生,,,长因子的营养缺陷型多数是负变株但有一株精氨酸缺陷型产酸比亲株增加并发,现凡是赖氨酸缺陷型均累积酮酸凡是添加生长因子后生长仍很微弱的菌株不累积柠檬。。酸而产生草酸和葡萄搪酸还得到过产酸比亲株增加的营养缺陷型突变株,,柠檬酸经乌头酸水合酶催化转变为异柠檬酸经异柠檬酸脱氢酶催化分解为酮,,戊二酸然后通过谷氨酸脱氢酶作用生成谷氨酸所以乌头酸水合酶和异柠檬酸
8、脱氢酶,。缺失菌株不能正常合成谷氨酸等已在酵每和细菌中发现有些谷氨酸缺,陷型是由于乌头酸水合酶缺失这种谷氨酸缺陷型菌株能累积比原养型亲株
