2011、1.1DNA重组技术的基本工具.ppt

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1、专题一　基因工程基因工程的概念基因工程（基因拼接技术或DNA重组技术）：按照人们的意愿，把某一生物的某基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造另一种生物的遗传性状。基因工程培育抗虫棉的简要过程：苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因导入棉花细胞抗虫棉花组织培育+载体1.1DNA重组技术的基本工具工具1限制性核酸内切酶──“分子手术刀”1.基因工程中的“分子手术刀”是指，目前有四千种,它们全部提取于生物。据酶切特点，可将其分为两类：一类是切割部位无特异性；另一类是只能在特定的核苷酸序列上切割，这种特定的核苷酸序列都是结构。在基因工程中使用最多是后一类

2、酶。后一类限制酶在切割部位进行切割时，有错位切和平切两种。切割时都是切断两个核苷酸之间的.键,其结果是DNA被截成两段并形成新的末端,新末端有两种即和。2.EcoRⅠ限制酶能识别序列，并在之间切开。SmaⅠ限制酶能识别。序列，并在之间切开。3.CCAGAATTCAGAGCCCGGAATTGCCGGTCTTAAGTCTCGGGCCTTAACGG上述DNA片段在EcoRⅠ限制酶/SmaⅠ限制酶切割后分别是段和段.GAATTCG和ACCCGGGG和C限制酶回文微磷酸二酯平末端黏性末端21黏性末端的形成平末端的形成中轴线平末端SmaⅠ限制酶SmaⅠ限制酶工具2DNA连接

3、酶──“分子缝合针”1.“分子缝合针”即，据其来源不同可分为两类，一类是来自大肠杆菌的。连接酶，另一类则是来自的T4DNA连接酶。两者都是将链DNA片段“缝合”起来，恢复被酶切开的两个核苷酸之间的键。但它们的作用有差别：连接酶只能作用于黏性末端，而连接酶两种末端都起作用。双磷酸二酯DNA连接酶E·coliDNAT4噬菌体限制酶E·coliDNAE·coliDNAT4DNA2.DNA连接酶与DNA聚合酶的作用有何差别？DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶作用部位DNA

4、连接酶作用部位氢键连接不需要酶磷酸二酯键AC磷酸二酯键AATTCGGCATAC……TATCGTACGATAGGTACTTAA…ATAGCATGCTATCCATGGCCGTATG…目的基因…TCCTAG…AGGATCTTAAAATTCCATAC…GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGGGTATG…P6重组DNA分子的模拟操作AATTCGGCATAC……TATCGTACGATAGGTACTTAA…ATAGCATGCTATCCATG目的基因…TCCTAG…AGGATCTTAAAATTCCATAC…GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGGGT

5、ATG…GCCGTATG…工具3基因进入受体细胞的载体──“分子运输车”1.在基因工程中使用的载体除来自细菌的。外，还有、等，它们的本质都是。2.作为运送目的基因的载体，必须具备哪些条件？质粒人噬菌体的衍生物动植物病毒双链DNAa.具有多个，供插入其中。b.能在宿主细胞中或整合到宿主DNA上。c.具有某些特殊的，便于鉴定、筛选。限制酶切割位点目的基因自我复制同步复制标记基因复制原点目的基因插入位点氨苄青霉素抗性基因