刺参微卫星标记与生长性状体重_体长的相关分析

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1、第35卷第4期水产学报Vol．35，No．42011年4月JOURNALOFFISHERIESOFCHINAApr．，2011文章编号:1000－0615(2011)04－0501－08DOI:10．3724/SP．J．1231．2011．17204刺参微卫星标记与生长性状体重、体长的相关分析11*1，3211孙国华，杨建敏，孙孝德，宋志乐，王卫军，刘小静(1．山东省海洋水产研究所，山东烟台264006;2．山东烟台市芝罘区渔业技术推广站，山东烟台264001;3．上海海洋大学水产与生命学院，上海201306)摘要:运用单标记分析法分析了10个微卫星位点与控制体重、体长数量性状的QTL的连锁

2、关系。10对微卫星引物在8月龄具有生长性状差异的60个刺参个体基因组DNA中扩增得到50个等位基因，每个微卫星位点等位基因数3～7个，平均有效等位基因个数5．0。10个微卫星位点的多态信息含量为0．2680～0．8256不等，观测杂合度为0．0833～0．6667。采用SPSS软件对刺参的体重、体长生长性状和微卫星位点相关性进行分析，结果显示，微卫星位点AjSSR02基因型AB、AD、CD与体重和体长相关，AjSSR04标记中等位基因A对生长性状有正面影响，位点AjSSR06基因型FF个体仅平均体重与其他基因型个体显著差异，AjSSR09标记的A和B等位基因分别对生长性状具有正面和负面不同影

3、响。关键词:刺参;微卫星;遗传多样性;生长性状;相关分析中图分类号:Q958．1;S968．9文献标识码:A海参产业作为我国渔业中一个新兴产业，已成之一。微卫星又称简单序列重复(simplesequence为我国水产养殖业内产值、利润最高的产业之一，repeats，SSR)，广泛而随机分布于真核生物的基因［2－3］目前年产值已超200亿元。作为海参主要养殖品组中。作为第二代分子标记手段，微卫星标种的刺参(Apostichopusjaponicus)，在分类上隶属棘记具有等位基因突变快、多态性高、杂合度大、信［4－5］皮动物门(Holothuroidea)、海参纲息含量丰富、呈共显性等显著优点

4、，在水产动(Echinodermata)、楯手目(Aspidochirotida)，其养殖物的种质鉴定、遗传进化、连锁图谱构建、QTL定［6－9］规模近几年发展迅速，但目前刺参养殖所用的亲参位等方面得到广泛应用。作为分析与重要经由于没有进行系统的品种选育和改良，刺参苗种质济性状的遗传连锁关系最理想的标记，国内已有量参差不齐，生长性状差异显著，刺参种质问题成鲤(Cyprinuscarpio)、大菱鲆(Scophthalmus为阻碍刺参养殖业健康持续发展的首要因素。maximus)、凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)等［10－12］研究表明控制经济性状的数量性状基因座与生长性状

5、相关微卫星标记的研究。(quantitativetraitlocus，QTL)存在主效基因［1］，一本实验以10个微卫星座位的多态性为基础，或两个主效基因可反映一个数量性状表型变异的分析其与刺参体重、体长的相关性，采用单标记分10%～50%以上。利用分子遗传标记进行标记辅析法筛选与刺参生长性状相关分子标记，为刺参助选择(markerassistedselection，MAS)，找到与这体重和体长的间接选择提供参考数据，同时也为刺参经济性状的QTL定位和进一步分子标记辅些数量性状位点相连锁的分子遗传标记，实现缩助育种奠定基础。短世代间隔、早期选种及提高选种准确性，并加快新品种的培育，是当今动物

6、遗传育种研究的热点收稿日期:20101105修回日期:20110117资助项目:山东省良种工程项目(2008—2011);山东省优秀中青年科学家奖励基金(博士基金)项目(2008BS06004);山东省科技攻关项目(2008GG10005023)通讯作者:杨建敏，E-mail:ladderup@126．com502水产学报35卷和终浓度为100μg/mL蛋白酶K，55℃消化3h1材料与方法或37℃过夜，等体积酚氯仿(酚∶氯仿=1∶1)、氯1．1材料仿抽提，二倍体积乙醇沉淀，TE溶解，紫外分光光实验所用的刺参群体来自蓬莱刺参养殖场。度计定量，－20℃保存备用。同批次亲本刺参亲本繁育后代，随机选

7、取同一养微卫星引物的设计及筛选实验所用微卫殖池中8月龄刺参60头，个体编号，测量体长体星引物序列来自刺参基因组磁珠法富集及重生长数据，剖取纵肌，液氮保存。GeneBank刺参EST序列筛选所得微卫星位点设［13］1．2实验方法计，引物在上海生工生物技术公司合成，筛选生长表型性状度量由于不同条件下刺参出10对多态性较高的引物用于后续研究(表1)。体形变化差异巨大，为保证测量数据的有效性和微卫星DNA的扩增以60