免疫组化质量控制标准化管理

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1、免疫组化质量控制标准化管理　　[摘要]探讨免疫组化室内质量控制的标准化管理，根据本科室免疫组化质量控制管理实际，从实验前、实验中、实验后三方面阐述免疫组化质量控制标准化管理细则，总结在实验过程中的经验和体会，提高免疫组化检测结果的准确性和可靠性。[关键词]免疫组化；质量控制；标准化管理[中图分类号]R446.8[文献标识码]C[文章编号]1673-9701（2013）31-0134-03免疫组化染色技术在现代病理诊断中的应用日益广泛，12对各类肿瘤的确诊及鉴别诊断具有重要意义，而且在肿瘤患者个体化治疗、靶向治疗方案的选择及预后判断方面越来越受到临床医生的青睐，已经成

2、为病理诊断中不可或缺的辅助手段[1]。因而很多单位，包括基层医院也开展了这个项目。随之而来的是，免疫组化质量控制问题也凸显出来了。这其中有实验员操作不当的因素，也有其他的因素，如组织固定不好、试剂效价和试剂盒质量问题等等，各免疫组化实验室质量管理水平参差不齐[2，3]。目前国内尚无免疫组化标准化管理的统一标准，因而在众多繁杂的条件中，探索找到一个相对稳定的免疫组化质量控制的条件，即所谓的标准化管理方法具有重要意义。笔者根据本科室的实际情况，总结免疫组化室内质控管理的一点心得体会，从实验前、实验中、实验后三方面浅谈免疫组化室内质量控制如何实现标准化管理。1实验前的标准

3、化管理1.1组织处理的标准化组织处理得当是成功制片的关键，对免疫组化染色结果的影响尤其重要，主要包括取材、固定、脱水等环节。如果组织处理不良，那么在其后的任何阶段均难以补救。组织或细胞固定的目的是使细胞内蛋白质凝固，终止或减少外源性或内源性酶的反应，防止细胞自溶，以保持组织细胞的固有形态和结构，更重要的是保存组织或细胞的抗原性，防止抗原的丢失或弥散。因此，标本应尽可能保持新鲜并及时进行固定。我们科室积极与临床一线沟通，宣传固定的意义、方法和要求，拟定以下标准：手术标本离体后30分钟内，用10%中性缓冲福尔马林固定。固定时间为小标本6～12h，大标本12～24h。组织

4、取材厚度为3～4mm，放入全自动脱水机进行脱水[4]。组织处理不好对抗原修复也产生影响，热修复时脱片的概率将会增大。1.2免疫组化切片的标准化1.2.1玻片处理及切片厚度12用于免疫组化的玻片一般都需要进行防脱片涂胶处理，目前常用的有氨丙基三乙氧基硅烷和L-多聚赖氨酸，防脱片的效果对比其他粘附剂都要好[5]。我们采用的是L-多聚赖氨酸，效果很好。采用3～4μm连续切片[6]，切片厚度不能过于求薄，太薄由于抗原的减少，会导致抗体阳性表达的减弱，也不宜太厚，太厚在热修复过程中容易导致脱片。1.2.2抗原修复方法福尔马林固定组织导致组织中抗原决定簇封闭，也就是组织细胞经福

5、尔马林固定后，导致抗原决定簇的三维结构发生异常改变，使抗原决定簇被掩盖或原来位于表面的一些抗原决定簇因折叠而形成隐蔽的抗原决定簇，因此抗原的理化性质发生了显著的变化，表位空间结构改变导致许多抗原免疫活性丢失。但这一变化是可逆的，可通过抗原修复。目前抗原修复有两种方法：酶消化法和热修复法。抗原修复方法的选择关系到组织抗原能否暴露充分，这对免疫组化染色结果有很大影响。有很多文献比较了各种抗原修复方法的优劣，目前，被认为效果最好、最常用的修复方式为高压加热修复[7-9]。我们将微波加热与高压加热的方法进行比较，发现阳性定位于细胞核的抗体，如P53、Ki-67等的核表达，在

6、高压修复后明显强于微波修复，因此我们选择高压加热修复，抗原修复液为柠檬酸盐，修复时间为高压锅出气后2min自然冷却，时间过短，抗原暴露不够，时间过长，导致背景过深。1.2.3抗原修复液的选择12加热抗原修复缓冲液有多种如柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）、Tris（pH7～8）、EDTA（pH8.0）等，目前首选柠檬酸盐缓冲液（pH6.0），优点是染色背景清晰，适合于大多数抗体。Tris和EDTA两种修复液对部分抗原修复效果较强，但其染色背景同时加深，如使用不当易造成假阳性结果。值得注意的是，没有一种抗原修复液能适合于所有的抗体，柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）可作为免疫组化

7、常规使用的抗原修复缓冲液，但也不能除外某些抗体适于用EDTA和Tris缓冲修复液。一般抗原比较难于表达的抗体多选择后两者。1.3试剂管理的标准化1.3.1试剂清单及使用记录的管理12试剂的种类、公司有很多，为了方便管理，我们创建了一个“免疫组化试剂登记表”Excel电子表格，进行试剂清单的管理，简洁又规范（图1）。登记表的内容包括抗体名称、类型、稀释度、是否修复、克隆号、编号、批号、公司名称、库存量、有效期、接收日期、启用日期、用完日期等，也可以根据各单位实际情况自己添加内容。所有试剂应保证在有效期内使用，只有这样才能确保抗体的效价。因此，登记表中有效期、用完日