《脱毒苗培养》PPT课件.ppt

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1、第二节脱毒种苗生产及病毒检测技术一、脱毒的意义：无性繁殖作物长期营养繁殖，易受病毒侵染，而使病毒在体内积累，导致种性退化，造成产量下降或品质降低甚至死亡，给农业造成巨大损失。通过茎尖培养获得无病毒种苗，对退化品种进行提纯复壮。提高产量和品质，如马铃薯脱毒可提高产量30-60%,提高了经济效益。此外，由于减少农药使用，可以保护生态环境。脱毒技术主要应用于各种无性繁殖植物，如草莓、马铃薯、甘薯、苹果、香蕉、甘蔗等。二、脱毒方法：（一）茎尖分生组织培养脱毒：1.脱毒原理：病毒在植物体内的分布不均匀，越靠近顶端区域，带毒越少，顶端分生组织（0.2-0.5mm）不带病毒或含病毒量极低。因此，分离分生组织

2、细胞进行培养，可以获得无病毒种苗。2.茎尖分生组织培养脱毒的基本程序：一般包括培养基选择和制备、带脱毒材料的表面、灭菌、茎尖分生组织分离、接种和培养、诱导芽分化和小植株增殖、诱导生根、驯化移栽等环节。茎尖分生组织的分离需要在超净工作台上借助体视显微镜进行。茎尖放在培养皿内进行解剖，一只手用镊子固定，另一手用解剖针将叶片和叶原基层层剥掉，当露出半圆形顶端分生组织时，将分生组织切下，接种与培养基上。virus-freetissuevirusparticlesfoundhere3.脱毒效果与茎尖大小的关系：脱毒效果和茎尖分生组织大小直接相关，茎尖分生组织越小，脱毒率越高，但生长速度慢。如草莓茎尖切取

3、0.2-0.3mm时，脱毒率达到100%，而切取1.0mm时，脱毒率为50%。因此，脱毒培养时，需要兼顾脱毒率、成活率及茎尖发育成完整植株的能力。既要脱除病毒，也要使茎尖分生组织迅速生长发育。一般茎尖分生组织大小以0.2-0.5mm为适宜。（二）微体嫁接脱毒：微体嫁接是在无菌条件下，将极小(<0.2mm）的茎尖嫁接到试管内的无菌实生苗砧木上，经培养，待接口愈合发育为完整植株而达到脱毒的效果。该方法已在柑橘、苹果、葡萄、山茶等园艺植物中应用。微体嫁接微体嫁接的方法：（1）试管砧木的准备:将无病毒种子表面灭菌后接种与MS培养基，黑暗条件下培养15d使其发芽。（2）茎尖嫁接：在超净工作台上，将幼苗的

4、上胚轴和子叶去掉，根系截短，在离上胚轴顶端越0.5cm处斜向下切一深达木质部，长2-3cm的切口，在斜切口末端横切一刀，用去掉切下部分。在体视显微镜下，从待脱毒样品上切取0.2mm的茎尖分生组织，小心放于切口的水平面上，切面向下并与砧木切口形成层组织紧密贴合，然后接于培养基上。（3）嫁接苗培养：将嫁接苗置于光下培养，光照时数16h，嫁接1周后形成愈伤组织，2-3周愈合，5-6周后接穗发育为新梢。2.微体嫁接脱毒的关键：影响微体嫁接成活率的主要因素为接穗大小和取样时间。与接穗大小呈正相关，而无病毒植株获得与接穗茎尖的大小呈负相关。茎尖分生组织小于0.2mm可以脱除多数病毒，春季取材嫁接的成活率高

5、于其他季节。（3）热处理脱毒：通过热处理可以由受病毒侵染的个体得到无病毒植株，其原理是利用病毒与植物的耐热性不同，在高于常温的环境下，植物组织中的病毒受热后可被部分或全部钝化或失去活性，而寄主植物组织很少或不会受到伤害。或高温下植物生长快，而病毒增殖慢而使植物新生部分不带病毒。1.热处理脱毒方法：可以通过温汤浸渍或热空气处理法脱毒，前者对休眠芽效果较好，后者对活跃生长的茎尖效果较好。热空气处理即把旺盛生长的植物移入热疗室，在35-40℃下处理一定时间（几分钟到数周）热处理后将茎尖切下嫁接于无病毒砧木或进行组织培养。热处理温度应逐步升高，直到要求温度。温汤浸渍的材料常用50-55℃处理10-50

6、min或35℃温水处理30-40min。2.热处理脱毒条件：（1）温度和持续时间：因病毒种类而异，有些33-34℃处理28-33d即可脱毒，而有些必须在39-42℃处理50-60d，耐热杆状病毒热处理脱毒效果差。在植物的耐热范围内，温度越高，脱毒效果越好。一般采用35-38℃.尤其37℃恒温处理30±2天为普遍。也可采用高低温处理减少对植物的损伤。如马铃薯40℃（4h）+16-20℃（20h）。（2）湿度和光照：湿度以70-80%为适宜。光照以自然光最好。（3）前处理：27-35℃1-2周。（四）其他脱毒方法：花器官培养脱毒：由植物的花器官培养脱分化形成愈伤组织，然后再分化不定芽，可以获得无毒

7、苗。如草莓花药培养。2.珠心胚培养脱毒：柑橘类珠心胚与微管组织没有联系，一般不带毒，可以利用珠心胚进行培养获得。3.化学脱毒:采用病毒唑等试剂处理材料或添加到培养基中可以钝化病毒，达到一定的脱毒效果。4.超低温处理脱毒:经过冷冻保护剂处理过的茎尖材料，采用液氮处理（-196℃）可以钝化病毒，达到脱毒效果，该方法已在香蕉等果树中成功应用。5.合并热处理、茎尖培养或微嫁接脱毒：采用多种方法同时处理可以