草莓的脱毒苗培养.doc

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1、草莓的脱毒苗培养技术（1）热处理脱毒 将草莓植株在40～41℃温度下处理4～6周，然后取微茎尖培养。 （2）微茎尖脱毒 ①初代培养 取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2～4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动促进药液的渗透。在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有1个叶原基的茎尖为好。0.2mm的茎尖无病毒率可达到100%，但接种后的成活率下降，并延长培养时间。茎尖分离后，迅速接入培养基MS+BA0.25+NAA0.25或White+IAA0.1中。培养

2、条件为22～25℃，日照16～18h/d，光强3000Lx。经2～3个月的培养，可生长分化出芽丛，一般每簇芽丛含20～30个小芽为适。注意在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠，所以较高的温度和充足的光照时间必须保证。 ②继代培养 把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，以利分株，待苗长大到1～2cm时，可将芽丛小块分成单株，再转入前述的分化培养基中，又会重复上述过程，达到扩大繁殖的目的。 ③生根培养 在培养基中加入NAA 1mg/L或IBA 1mg/L，•使发根整齐，由于草莓地下部分生长加快，发根力较强，也可将具有两片以上正

3、常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根。 ④驯化 用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带的琼脂培养基。•事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂。栽前压实，浇透水，用竹签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合。 栽后的试管苗要培养在湿度较大的空间内，•一般加设小拱棚保湿，并经常浇水，以增加棚内湿度，以见到塑料薄膜内表面分布均匀的小水珠为宜。•约过7～10d 后。当检查有一定的根系生出，可逐渐降低湿度和土壤含水量，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。  花药

4、(Pollen)培养 花药培养操作简单，•因经愈伤组织途径，再分化得到的即为无病毒苗，所以可免去病毒鉴定工作。 （3）取材与培养 取花粉发育单核期的花蕾，置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿。将处理放入3～4℃冰箱中低温保存3～4d。经预处理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清液中消毒10min，用无菌水冲冼3次。然后在超净工作台上剥取花药，立即接种。花粉发育时期可采用醋酸洋红压片签定，培养基为MS+2.4－D 0.4 +IAA2。去分化阶段培养条件为24～26℃，10h/d,1500Lx，2

5、0d后可产生乳白色的愈伤组织。 （4）植株分化 将诱导出的花药愈伤组织转移至1/2 MS基本培养基中，添加GA 0.5，BA 0.5和三十烷醇4mg/L。愈伤组织经培养后很快转绿，以后微带淡紫红色，•15d后在表面分化出半球形小突起，转为绿色。20天后分化出幼叶、幼茎，并有不少突起物，以后陆续分化出新梢。   草莓无病毒苗的鉴定Identification 草莓花药培养得到的为无病毒苗，•而用生长点培养得到的植株，则必须经过病毒鉴定，确定其不带病毒，才可以大量繁殖，用于生产。 （5）草莓病毒的种类 草莓病毒主要有四种，为斑驳病毒，皱

6、叶病毒，脉结病毒和轻型黄边病毒。斑驳病毒在EMC指示植物上表现不整齐的黄色小斑点；皱叶病毒在指示植物UC—1上产生不整齐的小斑点，以及不整齐的叶脉，叶柄暗褐色；脉结病毒在指示植物EMC上表现小叶向后反转成风车状，尖端卷曲，叶脉成带状褪绿；轻型黄边病毒在EMC指示植物产生红叶，数日即枯。 （6）草莓病毒的鉴定方法 因草莓的病毒在通过汁液接种时不感染，所以通常采用小叶嫁接法来进行鉴定。 首先从被鉴定的草莓上采集长成不久的新叶，除去两边的小叶，中央的小叶带1～1.5cm的叶柄，•把它削成楔形作接穗。而指示植物则除去中间的小叶，在叶柄的中央

7、用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用线把接合部位包扎好。为了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林。•为保证成活，在二周内，可罩上塑料袋，置于半见光的场所。约经两周时间，撤去塑料袋。若带有病毒，嫁接后1～2个月，在新展开的叶、匍匐茎或老叶上会出现病症。 草莓无病毒苗的繁殖和利用(Propagation and Utilization) （7）防止蚜虫的危害 草莓无病毒苗的繁殖重要的是要防止无病毒苗的再度污染。•由于草莓病毒主要是蚜虫传播的，•所以要搞好防蚜虫工作。传播草莓病毒的主要有草莓茎蚜、桃蚜和棉蚜。其中分布最广泛的是草莓茎蚜，

8、茎蚜的身体着生有钉状的毛，可以寄生在寄主的全株各个部位上。一草一木防治时可使用马拉松乳剂，氧化乐果乳剂等接触杀虫剂，防治期在5～6月和9～10月，特别是9～10月一次，可防止蚜虫的越冬。     为保证种苗的无病毒，在原种种苗生产阶段