猪伪狂犬疫苗研究进展说课材料.ppt

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1、猪伪狂犬疫苗研究进展母猪不发情、返情、屡配不孕等。公猪不育、发生睾丸肿胀、萎缩，失去种用能力。育肥猪表现为慢性呼吸道症状、增重迟缓、饲料报酬降低、推迟上市的时间猪伪狂犬疫苗的研究进展目前，疫苗接种是预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病主要的措施之一。国内外已研制出猪伪狂犬病的灭活疫苗、弱毒疫苗、基因缺失弱毒疫苗已经相对成熟，而病毒载体重组疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗尚处于实验室研究阶段。一、灭活疫苗灭活疫苗是将猪伪狂犬病毒接种于鸡胚或细胞，当病毒滴度达到要求时收获病毒，灭活后加入免疫佐剂，从而制成灭活疫苗。1.灭活疫苗优点。安全性高，

2、不会引起散毒，也不会带来潜伏感染的问题。2.灭活疫苗缺点。灭活疫苗不能将内源性蛋白抗原提呈给免疫系统，因而不能诱导细胞毒T细胞反应(CTL)。疱疹病毒本身的免疫原性与毒力有一定的相关性，因此灭活疫苗的免疫效果一般较差，并且灭活疫苗使用的免疫剂量较大，偶尔会发生过敏反应，故在生产上已经较少应用。二、自然缺失弱毒活疫苗弱毒活疫苗是将分离到的野毒株经非猪源细胞反复传代，或适应鸡胚，或加入致突变剂在高于一般的培养温度条件下，在细胞上反复传代而获得的疫苗，如匈牙利的Bartha株、罗马尼亚的Bucharest株、BUK株、TK200株

3、、北爱尔兰的NIA4株、法国Alfort-26株、前苏联的VGNK-I株、保加利亚MK25株、南斯拉夫的Bkal68株和Govacc株等弱毒株。目前使用较多的是Bartha、Buk毒株。我国目前广泛使用的PR弱毒冻干疫苗(Bartha-k61)是一种gI／gE双基因缺失弱毒疫苗，由于该基因缺失而进一步阻断弱毒株回复毒力的可能性，所以大大提高了这种弱毒苗的安全性。1.自然缺失弱毒活疫苗的优点。弱毒苗具有良好的免疫原性，而且价格低廉，至今仍在伪狂犬病的防控中起着重要的作用。2.自然缺失弱毒活疫苗的缺点。未经充分致弱的弱毒苗的毒力

4、可能会返强而导致疾病的流行；弱毒疫苗可建立潜伏感染，并有可能散毒。三、基因工程疫苗随着分子生物学的发展，猪伪狂犬病病毒的基因组结构、基因缺失对病毒生物学性质和免疫原性的影响得到了广泛研究，猪伪狂犬基因工程疫苗的研究得到更深入的发展。猪伪狂犬基因工程疫苗包括：基因工程缺失弱毒活疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗、重组病毒疫苗。（一）基因工程缺失弱毒活疫苗猪伪狂犬基因缺失主要包括对与毒力相关的基因如TK、RR、gE、gl等基因的缺失以降低病毒毒力；对糖蛋白基因如gG、gC、gD等基因的缺失以引入选择标记或阻止感染性病毒的产生，从而致弱猪

5、伪狂犬病毒，同时又保持其较强的免疫原性。基因工程缺失疫苗的研制始于20世纪80年代初。1.第一代基因缺失疫苗。第一代基因缺失疫苗指缺失PRV一个主要的毒力基因获得的疫苗。1984年，Kit等以PRVBUK为起始材料，并以BUK疫苗株为亲本，通过缺失TK（腺苷激酶）基因序列中的148bp片段，构建出PRV的TK缺失株PRVBUK-d13株。试验证明，该疫苗对猪是安全的，并能提供有效的保护，5～6周龄猪在免疫接种后能产生中和抗体，在攻毒后能表现出再次免疫应答。Quint等对PRVNIA-3株的US区进行部分缺失(gE基因缺失)，

6、构建的PRV突变株能明显降低PRV对小鼠和10周龄仔猪的毒力，可使免疫猪能抵抗强毒的致死攻击。但该突变株对3日龄仔猪仍具有较强的毒力。TK基因缺失疫苗不仅能较好地免疫猪只，而且免疫猪后还可以通过PCR的方法将免疫接种猪与自然感染猪区分开来。但是，由于TK基因属于酶蛋白基因，在体内不能产生其相应的抗体，因此仅缺失TK基因不能用血清学方法区别开免疫接种猪与自然感染猪，要将此区别开来必须缺失相应的糖蛋白基因。鉴于此，许多学者在TK基因缺失的基础上又缺失了相应的糖蛋白基因而构建了含TK基因缺失的双缺失和多缺失疫苗株。2.第二代基因缺

7、失疫苗。第二代基因缺失疫苗除了在TK基因引入了一个缺失外，在非编码必需糖蛋白的基因内引入了一个新的缺失。或插入一个报告基因，这样得到的突变株就不能产生被缺失的糖蛋白，因而免疫动物就不能产生相应的抗体，因此可以通过血清学方法将免疫接种猪与自然感染野毒的猪相区别。这也是第二代基因缺失疫苗的最显著特点。还值得注意的是有些糖蛋白的缺失，可以进一步降低毒力。第一个申请专利并注册使用的PRV基因工程疫苗OM-NIVAC-PRV就是TK基因缺失疫苗。在我国，PRVEaTK-株基础上构建了PRVEaTK-/gG-、TK-/gE-疫苗株上述基

8、因缺失疫苗的构建成功，为伪狂犬病的根除计划打下了物质基础。除此之外，人们还将注意力集中在核苷酸还原酶(RR)、蛋白激酶(PK)、碱性酸外切酶、脱氧尿苷三磷酸激酶等与PRV毒力相关的基因上，试图通过缺失这些基因，更进一步地降低疫苗毒株的残余毒力，从而使突变株更为安全。（1）基因工程缺失弱毒活