流式细胞分析技术演示教学.ppt

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1、流式细胞分析技术与之相关的科学技术激光技术数字计算机技术电子物理技术电子摄像技术光电测量技术荧光细胞化学技术单克隆抗体技术等上海交通大学医学院-细胞的形态学参数-生物学特征-细胞化学成分及含量-细胞的功能从定量的角度研究上海交通大学医学院概念流式细胞仪（FlowCytometer)集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。流式细胞术（FlowCytometry，FCM）利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析

2、技术。FALSSensorLaser上海交通大学医学院流式细胞仪特点单细胞悬液或生物颗粒分析速度高多参数精度高当代最先进的细胞定量分析技术上海交通大学医学院FCM还可在对样品细胞多参数分析测定的基础上，结合多种细胞生物学特性，将样品中特定的细胞亚群高纯度地分选（sorting）出来（活细胞点对点分选），单独收集以供进一步深入研究如：形态学检查、细胞功能研究、细胞培养、分子生物学研究上海交通大学医学院流式细胞发展史1930年，Caspersson和Thorell开始致力于细胞的计数。1934年，Moldaven是世界上最早设想使细胞检测自动化的人，他试图用光电仪记

3、录流过一根毛细管的细胞。（从固定式细胞分析-流动式）1953年，Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理，成功的设计红细胞光学自动计数器。同年，Parker和Horst描述一种全血细胞计数器装置，成为流式细胞仪的雏形。1965年，Kamemtsky等提出两个设想，一是用分光光度计定量细胞成分；二是结合测量值对细胞分类。1967年，Kamentsky和Melamed在Moldaven的方法的基础上提出细胞分选的方法。上海交通大学医学院流式细胞发展史1969年，VanDilla，Fulwyler及其同事们在LosAlamos，NM（即现在的NationalF

4、lowCytometryResourceLabs）发明第一台荧光检测细胞计。1972年，Herzenberg研制出一个细胞分选器的改进型，能够检测出经过荧光标记抗体染色的细胞的较弱的荧光信号。1973年，BD公司与美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了世界第一台商用流式细胞仪FACSI。从此，大量的厂家不断研制生产出自己的流式细胞仪，流式细胞术进入了一个空前飞速发展的时代。1979年，SSMU:FCM推广1980年，BJNU:国内第一台FCM(FACSIII)进入九十年代，流式细胞术作为一门生物检测技术已经日臻完善，而随之而来的就是应用领域的日趋广泛。而今，流式细

5、胞仪已经深入到生物学、医学、药物学等的各个分支领域，并将在未来为我们的科学研究发挥更大的作用。上海交通大学医学院BDFACSCantoII上海交通大学医学院讲课内容基础理论1细胞样品制备技术2在医学生物学中的应用3上海交通大学医学院（一）FCM仪器的一般结构细胞流动室及其液流驱动系统（Z）激发光源及其光束成形系统（X）细胞信号检测（Y）分析、显示、记录系统Z细胞流轴线Y细胞荧光信号检测轴线X激发光轴线基础理论上海交通大学医学院FCM从原理上讲是一种在计算机技术支持下的高度自动化的细胞显微荧光脉冲分光光度仪。上海交通大学医学院（1）流动室与液流驱动系统流动室（Fl

6、owChamber/FlowCell）是流式细胞仪的核心部件。被检样品的细胞悬液流经流动室时，由液体动力学层流技术保证，其中的细胞一个一个排列成单行，逐个依次通过检测区流动室也可称为单细胞流发生器上海交通大学医学院层流是液体稳定流动的必要条件,管道中层流的形成要满足雷诺数dρVRe=<2300，η式中ρ、η分别为液体的密度和粘滞系数，d和V分别为管道的直径和液体的平均流速。FCM利用层流技术,使细胞流动稳定,并具有自聚焦作用,为细胞分析分选提供技术保证.上海交通大学医学院上海交通大学医学院InjectorTip荧光信号激光束鞘液流动室（FlowChamber）通

7、过流动室后细胞一个一个排列成单行,依次通过检测区.把流动室称为单细胞流发生器.流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。上海交通大学医学院液流中心由单列匀速运动颗粒组成的液柱为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。上海交通大学医学院液流驱动系统（示意图）流速与压力的关系服从Bernoulli方程，即P=(1/2)V2(忽略高度的变化)。

8、改变气压,就可获得不同的